202288. lajstromszámú szabadalom • Eljárás trombin-inhibitorok előállítására
29 HU 202288 B 30 ténik. Ennek megfelelően a parenterális adagolásra alkalmas gyógyszerkészítmények egységdózis formája az alkalmazás módjától függően dózisonként 0,4-7,5 mg találmány szerinti vegyületet tartalmaz. Ezek a gyógyszer-összetételek a hatóanyag mellett szokásos módon puffert, például foszfátpuffert, amelynek pH-értékét 3,5 és 7 között kell tartani, továbbá az izotónia beállításához nátrium-kloridot, mannitot vagy szorbitot tartalmaznak. Liofilizált vagy oldott formában lehetnek, mimellett előnyösek az antibakteriális konzerválószert, például 0,2-0,3X 4-hidroxi-benzoesav «etil-észtert vagy etil-észtert tartalmazó oldatok. A helyi alkalmazású készítmény lehet vizes oldat, arcviz vagy zselé, olajos oldat vagy szuszpenzió, vagy zsírtartalmú vagy különösen emulziós kenőcs. A készítmény vizes oldat formájában például úgy kapjuk, hogy a találmány szerinti hatóanyagot vagy annak farmakológiailag elfogadható sóját 4- -6,5 pH-jú vizes pufferoldatban oldjuk és kívánt esetben további hatóanyagot, például gyulladásgátlót, és/vagy polimer kötőanyagot, például polivinil-pirrolidont és/vagy konzerválószert adunk hozzá. A hatóanyag koncentrációja 0,1-1,5 mg, előnyösen 0,25-1,0 mg 10 ml oldatban, illetve 10 g zselében. Helyi adagolásra alkalmas olajos készítményt például úgy állítunk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet vagy annak terápiásán elviselhető sóját olajban szuszpendáljuk, adott esetben duzzasztószerek, így alumínium-sztearát, és/vagy felületaktív szerek (tenzidek), amelyek HLB-értéke (.hydrophilic- lipophilic- balance") 10 alatt van, így többértékű alkoholok zsírsav monoésztereinek, például glicerin-monosztearát, szorbitan-monolaurát, szorbitán-monosztearát vagy szorbitan-monooleát hozzáadása közben. Zsírtartalmú kenőcsöt kapunk például a találmány szerinti hatóanyagok vagy sóik kenhető zsiralapban való szuszpendálásával, adott esetben 10-nél kisebb HLB-értékú tenzid hozzáadása közben. Emulziós kenőcsöt a találmány szerinti hatóanyagok vagy sóik vizes oldatának lágy, kenhető zsiralapban való eldörzsölésével kapunk 10-nél kisebb HLB-értékű tenzid hozzáadása közben. Mindezek a helyi alkalmazási formák konzerválószert is tartalmazhatnak. A hatóanyag koncentrációja 0,1-1,5 mg, előnyösen 0,25-1,0 mg, körülbelül 10 g alapmasszában. A fenti és ezekkel analóg gyógyszerösszetételek mellett, amelyek az ember vagy emlős testén közvetlenül orvosi használatra alkalmasak, a találmány az ember vagy az emlősök élő testén kívül orvosi alkalmazásra kerülő gyógyszerösszetételekre és készítményekre is vonatkozik. Ilyen összetételeket és készítményeket elsősorban olyan vérhez adott alvadásgátló adalékként alkalmazunk, amely a testen kívüli keringésnek vagy kezelésnek (például extrakorporális keringés vagy dialízis mesterséges vesében), konzerválásnak vagy modifikálásnak (például hemoszeparáció) van alávetve. Összetételükben az ilyen készítmények, igy a készletben levő oldatok vagy az egységdózis formájú készítmények is a fenti injekciós készítményekhez hasonlóak; a hatóanyag mennyiségét, illetve koncentrációját azonban célszerűen a kezelendő vérre, vagy még pontosabban annak trombintartalmára vonatkoztatjuk. Megfigyelhető, hogy a találmány szerinti hatóanyagok (szabad formában) 5-szörös mennyiségű trombint teljesen dezaktiválnak, még nagyobb mennyiségben Í6 élettanilag ártalmatlan, és a keringő vérből nagy koncentrációban is nagyon gyorsan kiválnak, úgy hogy a túladagolás veszélye, például transzfúzióknál, nem áll fenn. A specifikus céltól függően az alkalmas dózis körülbelül 0,01-1,0 mg hatóanyag/1 vér, mimellett a felső határ veszély nélkül még túlléphető. A találmány különösen a példákban leírt, a hirudin aminosavszekvenciáját kódoló DNS-szekvenciákra, ilyen DNS-szekvenciákat tartalmazó expressziós plazmidokra, ilyen expressziós plazmidokkal transzformált mikroorganizmusokra, hirudin elleni monoklonális antitestekre, ilyen antitesteket termelő hibridóma sejtekre, és ilyen antitesteket tartalmazó immunassay teszt-kittekre, ezeknek a példákban leírt előállítási eljárására és a példákban a hirudin aktivitású polipeptidek transzformált mikroorganizmusok segítségével történő előállítási eljárására, valamint a példákban leirt új deszulfatohirudin-vegyületekre vonatkozik. A következő példák kapcsán részletesen ismertetjük a találmányt a korlátozás szándéka nélkül. Kísérleti rész A példákban használt rövidítések jelentése a következő: TNE oldat, amely 100 mmól NaCl-t, 50 mmól Tris-HCl-t pH = 7,5 és 5 mmól EDTA-t tartalmaz SDS nétrium-dodecil-szulfát EDTA etilén-diamin-tetraecetsav DTT 1,4-ditiotreitol (1,4-dimerkapto-2,3-butándiol) BSA marha-szérumalbumin EtBr etidiura-bromid Tris trisz-(hidroxi-roetil)-amino-metán Tris.HCl a trisz-mono-hidrokloridja 1. J. Dodt et al., FEBS Letters 165, 180 (1984) 2. P Walsmann et al., Pharmazie 36, 653 (1981) 3. S.A. Narang, Tetrahedron 39, 3 (1983) 4. K.L. Agarwal et al., Angew. Chem. 84, 489 (1972) 5. C.B. Reese, Tetrahedron 34, 3143 (1972) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
