202287. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán immun interferon és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

HU 202287 B

2

28. Lusky etc., Nature 293, 79 (1981).

29. Glzman etc., Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 44, 293 (1980).

30. Fiers etc., Nature 273, 113 (1978).

31. Reddy etc., Science 200, 494 (1978).

32. Boedtker etc., Prog, in Nucleic Acids Res. Mol. Biol. 19, 253 (1976).

33. Berger etc., Biochemistry 18, 5143 (1979).

34. Aviv etc., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 69, 1408 (1972).

35. Gurdon etc., J. Molec. Biol. 80, 539 (1975).

36. Stewart, The Interferon System. Springer, New York, 13-26 old. (1979).

37. Lehrach etc., Biochemistry 16, 4743 (1977).

38. Lynch etc., Virology 98, 251 (1979).

39. Wickens etc., J. Biol. Chem. 253, 2483 (1978).

40. Chang etc., Nature 275, 617 (1978).

41. Bolivar etc., Gene 2, 95 (1977).

42. Grunstein etc., Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 72, 3961 (1975).

43. Fritsch etc., Cell 19, 959 (1980).

44. Bimbóim etc., Nucleic Acids Res. 7, 1513 (1979).

45. Kafatos etc., Nucleic Acids Res. 7, 1541

(1979) .

46. Clewel etc., Biochemistry 9, 4428 (1970).

47. Taylor etc., Biochim. Biophys. Acta 442, 324 (1976).

48. Smith, Methods Enzymol. 65, 560 (1980).

49. Messing etc., Nucleic Acids Res. 9, 309 (1981).

50. Winzler, Hormonal Proteins and Peptides (szerk. Li), Academic Press, New York, p. 1 (1973).

51. Nathan etc., Nutre 292, 84= (1981).

52. Maxam etc., Methods in Enzymol. 65, 490

(1980) .

53. Crea etc., Proc. Natl. Acad. Sei. (USA) 75, 5765 (1978).

54. Southern, J. Molec. Biol. 98. 503 (1975).

55. Blin etc., Nucleic Acids Res. 3, 2303 (1976).

56. Lawn etc., Science 212, 1159 (1981).

57. Lawn etc., Nucleic Acids Res. 9, 1045 (1981).

58. Miller, Experiments in Molecular Genetics, p. 431-3, Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, New York (1972).

59. Beggs, Nature 275, 104 (1978).

60. Valenzuela etc., Animal Vims Genetics (szerk. Fields, Jaenisch és Fox) p. 57, Academic Press, New York (1980).

61. McCuthan etc., J. Natl. Cancer Inst. 41, 351 (1968).

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás rekombináns humán gamma- vagy immuninterferon előállítására, azzal jellemezve, hogy emberi szövetből mRNS-t nyerünk ki vagy ilyent szintetizálunk az mRNS-ből cDNS könyvtárat készítünk, ezt megfelelő plazmidba iktatjuk, és ezt a plazmidot valamely alkalmas baktériumba, előnyösen E. coliba transzformálva transzformánsokat készítünk, a transzformánsokat radioaktív vizsgáló mintával (próbával) átvizsgáljuk, a hibridizáló telepekből plazmidokat készítünk, ezek cDNS-ének szerkezetét megvizsgáljuk, az immuninterferon tulajdonságainak megfelelő polipeptidet kódoló cDNS-t magában foglaló plazmidot kiválasztjuk, ebből a humán immuninterferont kódoló DNS-szakaszt elkülönítjük és megfelelő szabályozó rendszerrel rendelkező vektorba iktatjuk, a vektort megfelelő baktérium törzsbe, élesztőtörzsbe vagy állati szövettenyészetbe transzformáljuk, a transzformánsokat megfelelő tápközegben tenyésztjük, és a tenyészetből a humán immuninterferont kinyerjük.

2. Eljárás a

5

10

15

20

25

30

35

1 10

CYS TYR CYS GLN ASP PRO TYR VAL LYS GLU ALA GLU ASN

20

LEU LYS LYS TYR PHE ASN ALA GLY HIS SER ASP VAL ALA 30

ASP ASN GLY THR LEU PHE LEU GLY ILE LEU LYS ASN TRP

40 50

LYS GLU GLU SER ASP ARG LYS ILE MET GLN SER GLN ILE

60

VAL SER PHE TYR PHE LYS LEU PHE LYS ASN PHE LYS ASP 70

ASP GLN SER ILE GLN LYS SER VAL GLU THR ILE LYS GLU 80 90

ASP MET ASN VAL LYS PHE PHE ASN SER ASN LYS LYS LYS

100

ARG ASP ASP PHE GLU LYS LEU THR ASN TYR SER VAL THR

110

ASP LEU ASN VAL GLN ARG LYS ALA ILE HIS GLU LEU ILE 120 130

GLN VAL MET ALA GLU LEU SER PRO ALA ALA LYS THR GLY

140

LYS ARG LYS ARG SER GLN MET LEU PHE ARG GLY ARG ARG 146

ALA SER GLN

16