202281. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szelektálható és önállóan replikálódó rekobináns dezoxi-ribonukleinsav expressziós vektorok előállítására
1 HU 202281 B 2 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás szelektálható és önállóan replikálódó rekombináns dezoxi-ribonukleinsav expressziós vektor előállítására, azzal jellemezve, hogy ligálunk a) egy indukciós körülmények között a példányszámot nemszabályozó „runaway” replikont, és b) egy biológiailag aktív szarvasmarha növekedési hormon származékot kódoló génnel leolvasási fázisban lévő transzkripciós és transzlációs aktivációs 10 szekvenciát, ahol a gén az alábbi nukleotid szekvenciájú: (1) 5’ ATG AAA GGG A AT TCT ATG GCC TTC I II I I I III I I I I I I I I I I II III 15 3’ TAC TTT CCC TTA AGA TAC CGG AAG CCA GCC ATG TCC TTG TCC GGC 3’ III III III III III III II l-R-Rl GGT CGG TAC AGG AAC AGG CCG 5’ 20 (2) 5’ ATG GAT GAT AAG TTT CCG GCT ATG I I I I I I III I I I I I I I I I I I I III 3’ TAC CTA CTA TTC AAA GGC CG A TAC TCT CTG TCC GGC 3’ III II I III III -R-R1 AGA GAC AGG CCG 5’ (3) 5’ ATG TTT CCA GCC ATG GCT CTA II I I I I I I I I I I I I I I I I III 3’ TAC AAA GGT CGG TAC CGA GAT TCT GGT 3’ III III -R-R1 AGA CCA 5’ (4) 5’ ATG TTC CCA GCT ATG TCT CTA I I I I I I III III III III III 3’ TAC AAG GGT CGA TAC AGA GAT TCT GGT 3’ III III -R-R1 AGA CCA 5’ (5) 5’ ATG GAT TTT CCG GCT ATG TCT I I I I I I III I I I I I I I I I I I I 3’ TAC CTA AAA GGC CGA TAC AGA CTG TCC GGC 3’ III III III -R-R1 GAC AGG CCG 5’ vagy 5 (6) 5’ ATG TTT CCA GCT ATG TCT CTA I I II I I III I I I I I I III III 3’ TAC AAA GGT CGA TAC AGA GAT TCT GGT 3’ III III -R-R1 AGA CCA 5’ ahol A dezoxi-adenil-csoport, G dezoxi-guanil-csoport, C dezoxi-citozil-csoport, T timidilcsoport, R a szarvasmarha növekedési hormon 9 (leucin)- 191. (fenil- alaninj-aminosavait kódoló dezoxi-ribonukleinsav szekvencia, és ahol R1 az alábbi transzlációs stop jelet kódoló dezoxiribonukleinsav szekvencia: 5’ TAA 3* 5’ TAG ill III 3’ 25 3’ III mi ATT 5\ 3’ ATC 5’ 5’ TGA 3’ 3’ ACT 5’. 30 (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a transzkripciós aktivációs szekvenciaként az E. coli lipoproteint vagy az E. coli triptofán 35 gén transzkripciós aktivációs szekvenciáját alkalmazzuk. (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vektorként egy plazmidot ál-40 lítunk elő. (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy transzlációs aktivációs szekvenciaként az E. coli lipoprotein szekvenciáját alkalmazzuk. 45 (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 5. A 4. igénypont szerinti eljárás a pCZ1920 plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a pCZIOl plazmid 10,2 kb nagyságú BamHI-Xbal fragmensét, az alábbi nukleotid szekvenciájú dezoxi-ribo-50 nukleinsav linkért 5’ CTAGAGGGTATTAATA ATG AAA GGG A AT TCT ATG GCC TTC CCA GCC II I I I I II I III I II III III I I I I I I III III III III III 3’ TCCCATAATTAT TAC ITT CCC TTA AGA TAC CGG AAG GGT CGG ATG TCC TTG TCC GGC CTG TTT GCC AAC GCT GTGCT 3’ I I I I I I III III III III III III III III I TAC AGG AAC AGG CCG GAC AAA CGG TTG CGA C 5’, és a pCZIOl plazmid 0,6 kb nagyságú BamHI-Xbal plazmid 10,2 kb nagyságú BamHI- Xbal fragmenfragmensét ligáljuk. sét, az alábbi nukleotid szekvenciájú dezoxi- ri(Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) bonukleinsav linkért 6. A 4. igénypont szerinti eljárás a pJRl plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy a pCZIOl 65 27
