202279. lajstromszámú szabadalom • Eljárás izopenicillin N-szintetáz és az azt kódoló DNS vegyületek előállítására
53 HU 202279 B 54 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás izopenicillin N-szintetázt kódoló rekombináns DNS vektor előállítására, azzal jellemezve, hogy a pIT335 plazmid 5 (NRRL B-15960) ~ 1,5 kb-s Nco-BamHI restrikciós fragmensét megfelelő hordozó vektorba építjük be. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alábbi DNS-szekvenciát 10 építjük be a hordozó vektorba: 5’ATG GGT TCC GTT CCA GTT CCA GTG GCC AAC GTC CCC CGA ATC GAT GTC TCG CCC CTA TTC GGC GAT GAC AAG GAG AAG AAG CTC GAG GTA GCT CGC GCC ATC GAC GCC GCA TCG CGC GAC ACA GGC TTC TTT TAC GCG GTG AAC CAC GGT GTC GAC CTG CCG TGG CTC TCG CGC GAG ACG AAC AAA TTC CAC ATG AGC ATC ACG GAC GAG GAG AAG TGG CAG CTC GCC ATC CGG GCC TAC AAC AAG GAG CAC GAG TCC CAG ATC CGG GCG GGC TAC TAC CTG CCG ATC CCG GGC AAG AAG GCG GTC GAA TCG TTC TGC TAC CTG AAC CCC TCC TTC AGC CCA GAC CAC CCG CGA ATC AAG GAG CCC ACC CCT ATG CAC GAG GTC AAC GTC TGG CCG GAC GAG GCG AAG CAC CCG GGG TTC CGG GCC TTC GCC GAG AAG TAC TAC TGG GAC GTC TTC GGC CTC TCC TCC GCG GTG CTG CGC GGC TAC GCT CTC GCC CTA GGT CGC GAC GAG GAC TTC TTC ACC CGC CAC TCC CGC CGT GAC ACG ACG CTC TCG TCG GTC GTG CTC ATC CGT TAC CCG TAC CTC GAC CCG TAC CCG GAG CCG GCC ATC AAG ACG GCC GAC GAC GGC ACC AAG CTC AGC TTC GAG TGG CAC GAG GAC GTG TCC CTC ATC ACG GTG TTG TAC CAG TCC GAC GTG CAG AAT CTG CAG GTC AAG ACC CCG CAG GGC TGG CAG GAC ATC CAG GCT GAC GAC ACG GGC TTC CTC ATC AAC TGC GGC AGC TAC ATG GCC CAT ATC ACC GAC GAC TAC TAC CCG GCC CCG ATC CAC CGC GTC AAA TGG GTC AAC GAG GAG CGC CAG TCA CTG CCC TTC TTC GTC AAC CTG GGC TGG GAG GAC ACC ATC CAG CCG TGG GAC CCC GCG ACC GCC AAG GAT GGG GCC AAG GAT GCC GCC AAG GAC AAG CCG GCC ATC TCC TAC GGA GAG TAT CTG CAG GGG GGA CTG CGG GGC TTG ATC AAC AAG AAT GGT CAG ACC TAA- 3’, P ahol A jelentése dezoxiadenil-gyök, G jelen- 40 tése dezoxiguanil-gyök, C jelentése dezoxicitidil-gyök és T jelentése timidil-gyök. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DNS-szekvenciát valamely plazmidba építjük be. 45 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a pIT337 plazmidot állítjuk elő. 5. Eljárás izopenicillin N-szintetáz termelésére képes mikroorganizmusok elöállitá- 50 sára, azzal jellemezve, hogy egy E. coli vagy Cephalosporium acremonium gazdasejtet az 1. igénypont szerint előállított rekombináns DNS vektorral transzformálunk. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal 55 jellemezve, hogy E. coli törzset transzformálunk. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Cephalosporium acremonium törzset transzformálunk. 60 8. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az E. coli K12/pIT335 törzset hozzuk létre. 9. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Cephalosporium acremonium/pPS21 törzset hozzuk létre. 10. Eljárás izopenicillin N-szintetáz előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely 5. igénypont szerint előállított gazdasejtet, ahol az izopenicillin N-szintetázt kódoló DNS-szakasz a gazdasejtben funkcionális átíró és transzlációs aktiváló szekvenciából való kifejeződéshez van elhelyezve, önmagában ismert körülmények között tenyésztjük, majd elválasztjuk a keletkezett terméket. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az E. coli /pIT337 gazdasejtet tenyésztjük. 12. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Cephalosporium acremonium/pPS20 gazdasejtet tenyésztjük. Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4981 - KJK 91.3911.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató 29
