202278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozott stabilitású, rekombináns gamma-interferonok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
23 HU 202278 B 24 G. A rekombinérts gamma-interferon és a CTC- rekombináns gamma-interferon stabilitásának összehasonlítása különböző biológiai folyadékokban Ampullánként 1x10® NE mennyiségű, az Escherichia coli alkalmazásával kapcsolatos példa szerint előállított rekombinált gamma-interferont és ampullánként lxlO6 NE menynyiségű, az N-végcsoportnál Cys-Tyr-Cys szerkezetet tartalmazó, rekombinált gamma-interferont (mindkét típus liofilizált volt, s az ampullák még 10 mg emberi szérum albumint, foszfát puffert és izotóniás mennyiségű nátrium-kloridot is tartalmaztak) desztillált vízben oldottunk, és a koncentrációt 4xl04 NE/ml értékre állítottuk be. Az interferonok in vitro stabilitását a különböző biológiai folyadékokban visszamaradó vírusellenes hatás meghatározásával értékeltük ki. A fenti interferon-oldatokat kilencszeres térfogatú nyúl szérumhoz, emberi szérumhoz és Eagle-féle MÉM táptalajhoz adtuk, amelyeket előzetesen elöinkubáltuk 10 percig vízfürdős inkubátorban, 37 °C-on és 4 °C-on. A tényleges inkubálás során, 0, 0,25, 0,5, 1, 4, 8, 24, 72 és 144 óra elteltével eg.v-egy alikvot részt gyűjtöttünk össze, és kilencszeres térfogatú Eagle-féle MÉM táptalajjal kevertük össze. A kapott mintákat -80 °C-on megfagyasztva tároltuk az interferon titerének meghatározásáig. Az interferon literét a CPE50 redukciós módszerrel határoztuk meg, Sindbis vírussal megfertőzött emberi bárányhártya sejtek (FL sejt) alkalmazásával. A kapott eredményeket a 3. ábra tartalmazza, amelyen százalékban kifejezve ábrázoltuk a megmaradt aktivitást. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az X-Y-ASP-PRO-TYK-VAL-LYS-GLU-ALA-GLU-12 3 45 67 89 ASN-LEU-LYS-LYS-TYR-PHE-ASN-ALA-GLY- 10 11 12 13 14 15 16 17 18 HIS-SER-ASP-VAL-ALA-ASP-ASN-GLY-THR- 19 20 21 22 23 24 25 26 27 LEU-PHE-LEU-GLY-1LE-LEU-LYS-ASN-TRP- 28 29 30 31 32 33 34 35 36 LYS-GLU-GLU-SER-ASP-ARG-LYS-ILE-MET- 37 38 39 40 41 42 43 44 45 GLN-SER-GLN-1LE-VAL-SER-PHE-TYR-PHE- 46 47 48 49 50 51 52 53 54 LYS-LEU-PHE-LYS-ASN-PHE-LYS-ASP-ASP-55 56 57 58 59 60 61 62 63 GLN-SER-ILE-GLN-LYS-SER-VAL-GLU-TH R- 64 65 66 67 68 69 70 71 72 ILE-LYS-GLU-ASP-MET-ASN-VAL-LYS-PHE- 73 74 75 76 77 78 79 80 81 PHE-ASN-SER-ASN-LYS-LYS-LYS-ARG-ASP- 82 83 84 85 86 87 88 89 90 ASP-PHE-GLU-LYS-LEU-THR-ASN-TYR-SER- 91 92 93 94 95 96 97 98 99 VAL-THR-ASP-LEU-ASN-VAL-GLN-ARG-LYS- 100 101 102 103 104 105 106 107 108 ALA-ILE-H1S-GLU-LEU-ILE-GLN-VAL-MET- 109 110 111 112 113 114 115 116 117 ALA-GLU-LEU-SER-PRO-ALA-ALA-LYS-THR- 118 119 120 121 122 123 123 126 126 GLY-LYS-ARG-LYS-ARG-SER-GLN-MET-LEU- 127 128 129 130 131 132 133 134 135 PHE-ARG-GLY-ARG-ARG-ALA-SER-GLN 136 137 138 139 140 141 142 143 aminosav szekvenciájú - ahol X jelentése metionin csoport és Y jelentése glutaminsav csoporl, valamint bármely X.-126. és X.-142. közti aminosavszekvenciájú rekombináns gamma-interferonokat kódoló DNS szakaszok előállítására azzal jellemezve, hogy a) az X.-139. valamint az X.-143. aminosavszekvenciákat kódoló DNS szakaszok előállítása esetén természetes forrásból származó mRNS közvetítéssel az 1.-139. illetve 1.-143. aminosavszekvenciákat kódoló DNS kiónokat állítunk elő, vagy 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 14
