202272. lajstromszámú szabadalom • Eljárás algák előállítására
5 HU 202272 A 6 1. példa Bold-féle folyékony táptalajon, mely 100-500 jug/ml N-metil-N’-nitro-N-nitrozo-guanidint tartalmaz, 250 ml-es lombikban 25- -27 °C-on Scenedesmus obtisiusculus tenyészetet rézatott kultúrában 30 percig kezelünk. A kezelés után a sejteket vízzel gondosan kimossuk, majd agarral szilárdított Bold-féle táptalaj-sorozatra szélesztjük. A táptalaj-sorozat 3,125 /ug/ml-től 400 pg/ml-ig rendre kétszeres értékre növekvő mennyiségben szelént tartalmaz. A táptalaj-sorozaton tenyésztő túlélő sejtekből alakult telepeket elkülönítjük, és a kiválasztott sejtvonalakat laboratóriumi méretekben Bold-féle, legalább 20 Mg/ml szelént tartalmazó tápoldatban felszaporítjuk. Azokat a telepeket növeljük, melyek a szelént legjobban inkorporálják, és legalább 20 Mg/ml szelént tartalmazó tápoldatban a kontroll vad törzzsel azonos növekedési eréllyel rendelkeznek. Az elkülönített és vízzel gondosan mosott sejteket 65 °C-on megszáritjuk, majd ultrahanggal feltárjuk. Az algapor szelén-tartalmát atomabszorpciós módszerrel határozzuk meg. Az igy kapott algatörzsek és azok szelén-tartalma: Szelén-tartalom Mg/g algapor Kezeletlen vad I. törzs 50 Kezeletlen vad II. törzs. 30 FM-I - 120 jelű törzs 1300 FM-I - 1871 jelű törzs 2400 FM-441/87 jelű törzs 1600 FM-449/87 jelű törzs 1800 2. példa 10 literes algatenyésztó üvegbe 8 liter Knop-Pringsheim-féle tápoldatot töltünk, melyhez 40 mg nátrium-szelenitet adunk. Az igy kapott tápoldatot 121 °C-on 30 percig 1 bar túlnyomáson sterilezzük. A steril oldatot hűtjük, majd beoltjuk szelént inkorporálni képes Scenedesmus obtisiusculus alga szintenyészettel. A tápoldaton 25 °C-on 5 térfogatX C02-t tartalmazó steril levegőt buborékoltatunk ét, és a rendszert 4000 lux fényerejű, 440-520 és 640-700 um tartományba eső hullámhosszon világitó fénycsővel világítjuk meg. 14 napos tenyésztési ciklus után az algát a tápoldattól elkülönitjük, majd vízzel mossuk. Az igy kapott algamasszát ultrahanggal feltárjuk, majd 65 °C alatti hőmérsékleten óvatosan szárítjuk. Az algapor szelén-tartalma 1200 Mg/g* 3. példa 10 1-es algatenyésztő fermentorba töltött 8 liter desztillált vízben oldunk 8,0 g NaNOz-t, 0,8 g MgS04.7H20-t, 0,8 g KzHPO«-et, 2,5 ml Arnon-féle nyomelem-oldatot, továbbá 5 g szólócukrot, 0,1 g ciszteint és 0,1 g metionint. A tépoldatot kiegészítjük 50 mg nátrium-szelenittel, majd steril szűrőn való étáramoltatás után szigorúan betartott steril körülmények között beoltjuk szelént jól inkorporálni képes Scenedesmus obtisiusculus alga szintenyészettel. 4 napig 25-28 °C-on sötétben végzett tenyésztés után az algát a tápoldattól elkülönítjük, vízzel mossuk, majd a kapott algamasszát ultrahanggal feltárjuk, és végül 65 °C alatti hőmérsékleten szárítjuk. A kapott algapor szelén-tartalma 1380 Mg/g. 4. példa Mindenben a 2. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy a tápoldat sterilezését hőkezelés helyett G-5 jelű steril baktériumszűrön való átáramoltatással végezzük. Az így kapott algapor szelén-tartalma 1300 Mg/g. 5. példa Mindenben a 2. vagy 3. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy Scenedesmus obtisiusculus törzs helyett szelént jól inkorporólni képes Chlorella vulgaris algatörzset alkalmazunk, amelyet az 1. példa szerinti mutációs kezelésnek vetettünk alá. Az algapor szelén-tartalma: Szelén- tartalom Mg/g algapor .Vad' I. 140 .Vad’ II. 140 DV-35-42 törzs 3200 DV-78-20 törzs 2300 DV-104-21 törzs 1500 6. példa Mindenben a 2. vagy 3. példa szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy Scenedesmus obtisiusculus törzs helyett szelént jól inkorporálni képes Chlorella minitissima törzset alkalmazunk. Az igy kapott algapor szelén-tartalma 1400 Mg/g* 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
