202254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ciklodextrinek elválasztására
1 HU 202254 B 2 18,6 g gamma-ciklodextrint nyertünk, amelynek tisztasága 99,9%. 6. példa Az 1. példa szerint nyert hidrolizátumhoz a CGT- enzim hozzáadása után 30 perc múlva 15 g MEK (metil-etil-keton) és 15 g toluol elegyét adjuk. A kevertetést 70 órán át folytatva, 0,08% alfa-CD-t, 19,48% béta-CD-t, 0,59% gamma-CD-t tartalmazó konverziós elegyet kapunk. A konverziós elegy pH-ját sósavval 4 értékre állítjuk és leszűrjük. A komplex lepényt szűrón 50 ml desztillált vízzel kimossuk és a nedves nyers béta-ciklodextrint 500 ml desztillált vízben felszuszpendáljuk és a toluoltartalmat 2 órás vízgőz desztillációval lepároljuk. A toluolmentesített béta-CD oldatot 70 °C-on desztillált víz hozzáadásával 10%-os szárazanyagtartalomra állítjuk be, 1 g aktív szenet adunk hozzá és 70 °C-on történő 1 órás adszorpció után melegen leszűrjük. A szűrletet 50 tf % szárazanyagtartalomig bepároljuk és hűtőszekrényben egy éjszakán át kristályosodni hagyjuk. A kapott béta-CD kristályokat kiszűrjük és szárítjuk (194939 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás). A visszamaradt anyalúgot bekoncentráljuk, majd CD- tartalmát HPLC módszerrel megmérve a következő eredményeket kaptuk: alfa-CD tartalom 0,95%, béta-CD tartalom 1,85%, gamma-CD tartalom 4,8% (súly/térfogat). Ezután a béta-CD kiszűrése után maradt anyalúghoz 10 térfogat % kloroformot adunk, majd 1 órás erős kevertetéssel szobahőmérsékleten a béta- és gamma-CD-tartalmat lecsapjuk, és szűréssel elválasztjuk. A szűrletet oligoszacharidokat, főként dextrineket és kismennyiségű alfa-CD-t tartalmaz. Az alfa-CD kinyerése nagyipari üzemi méretekben gazdaságos, ekkor 1/5 részre történő bekoncentrálása után 5 térfogat % ciklohexánnal való kevertetés után szűréssel nyerjük ki az alfa-CD tartalmat. A kloroformos kevertetés után lecsapott, majd kiszűrt béta- és gamma-CD tartalmú csapadékot, a nedves súlyára számított 5- szörös mennyiségű vízben felszuszpendáljuk, atmoszférikus nyomáson történő vízgőzdesztillációval megbontjuk a béta- és gamma-CD-knek a kloroformmal alkotott komplexét, és eltávolítjuk a kloroform tartalmat. A kapott nyers CD-oldatot 3% ciklohexánnal szobahőmérsékleten 3 óráig erőteljesen keverjük, a nyert béta-CD-kloroform komplexet kiszűrjük. A gamma-CD tartalmú szűrletet 1% aktív szénnel derítjük és vákuumbepárlón 50% szárazanyagtartalomig bekoncentráljuk. Lehűlés után a kapott kristályokat szűrőn elválasztjuk, így 1,5 g gamma-CD-t nyerünk, melynek tisztasága HPLC-vel mérve 99,9%. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás alfa-amilázzal részlegesen hidrolizált, alacsony redukálóképességű szubsztrátból, a ciklodextrinekkel temer komplexet képező kombinált lecsapószerelegy jelenlétében, ciklodextrin-glükozil-transzferáz enzimmel nyert konverziós elegyből alfa-, béta-, valamint gammaciklodextrin elválasztására egymástól és a kísérő oligoszacharidoktól, azzal jellemezve, hogy a konverziós elegyből az egyes ciklodextrin-féleségeket kombinált oldószeres komplexképzéssel kinyerjük oly módon, hogy a konverziós elegyet a lecsapószerek feleslegének eltávolítására ioncserélőn tiszítjuk, majd a tisztítás után nyert ioncserélő effluenshez 1-20 térfogat % mennyiségben 1-4 szénatomos halogénezett alkán oldószert adva kicsapjuk a béta- és gamma-ciklodextrineket, miközben oldatban maradnak az alfa-ciklodextrin és a kísérő oligoszacharidok, majd a) az alfa-ciklodextrin kinyerése céljából az oldathoz 2-5 térfogat % mennyiségben és/vagy cikloalkanol oldószert adva, az alfa-ciklodextrint kicsapjuk, miközben oldatban maradnak az oligoszacharidok, azután a kicsapott alfa-ciklodextrint a szokásos módon elkülönítjük az oldattól; továbbá b) a béta-ciklodextrin kinyerése céljából a béta- és gammaciklodextrineket tartalmazó csapadékhoz vizet adva 10-20 térfogat %-os vizes szuszpenziót kapunk, melyhez 2-5 térfogat % mennyiségben cikloalkán és/vagy cikloalkanol oldószert adva oldatba megy a gamma-ciklodextrin, miközben a csapadékban marad a béta-ciklodextrin, melyet a szokásos módon elkülönítünk az oldattól; továbbá c) a gamma-ciklodextrin kinyerése céljából a gamma-ciklodextrint tartalmazó oldatot bepároljuk, és így kinyerjük a gamma-ciklodextrint. (Elsőbbsége: 1987. 11. 06.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a konverziós elegy tisztítására erős kevertágyas ioncserélőt, előnyösen Varion-KS (H+), illetve Varion-AD (OH') típusú gyantát tartalmazó kevertágyas ioncserélő oszlopot alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1987. 11. 06.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a béta- és gamma-ciklodextrinek kicsapására 1-4 szénatomos halogénezett atkánként előnyösen kloroformot alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1987. 11. 06.) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gamma-ciklodextrin oldására cikloalkánként előnyösen ciklohexánt, cikloalkanolként előnyösen ciklohexanolt alkalmazunk. (Elsőbbsége: 1987. 11. 06.) 5. Eljárás alfa-amilázzal részlegesen hidrolizált, alacsony redukálóképességű keményítő szubsztrátból, a ciklodextrinekkel temer komplexet képező kombinált lecsapószerelegy jelenlétében ciklodextringlükozil-transzferáz enzimmel nyert konverziós elegyből alfa- és gamma-ciklodextrin elválasztására, azzal jellemezve, hogy a) zömmel gamma-ciklodextrin kinyerése céljából a ciklodextrinek előállításakor keletkező konverziós elegyből a lecsapószer feleslegét 1-4 szénatomos alifás alkanollal extraháljuk 1-4 szénatomos alifás alkanol, 50-70 térfogat %-os vizes oldatával kioldjuk a gamma-ciklodextrint, az extraktumot polimer adszorbensen és ioncserélő gyantán tisztítjuk, majd a gamma-CD-t az elegyből kikristályosítjuk; továbbá b) zömmel alfa-ciklodetrin kinyerése céljából a ciklodextrinek előállításakor keletkező konverziós elegyben a lecsapószemek az alfa-ciklodextrinnel alkotott komplexe mellől elhidrolizáljuk a béta-, gamma-ciklodextrint és a kísérő oligoszacharidokat, majd a lecsapószer feleslegét vízgőzdesztillációval eltávolítjuk, azután az alfa-ciklodextrint komplexképzés után kikristályosítjuk. (Elsőbbsége: 1983. 12. 22.) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
