202211. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új imidazolin-származékok, és hatanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
3 HU 202 211 B 4 gően változik, előnyösen kb. 0,01 és 50 mg/kg, különösen 0,1-10 mg/kg lehet naponta. 1. kísérlet Alveoláris makrofágok vándorlására kifejtett hatás 3-4 kg-os japán fehér nőstény nyulakat altatás alkalmazása mellett leölünk. A tüdő NaCl-oldatos átmosásával kinyerjük az alveoláris makiofágokat. A makrofágok vándorlását a vizsgált csoportban 5% nyúlszérumot és 10~7 vagy 10-9 mól/1 vizsgálandó vegyületet tartalmazó RPMI-1640 közegben vizsgáljuk. A migrációs vizsgálatot 37 "C-on, 24 órán keresztül folytatjuk, a Journal of Leukocyte Biology 42, 197-203 (1987) irodalmi helyen ismertetett eljárást alkalmazva. A kapott migrációt kb. 15-szörös nagyításban kivetítjük és jelezzük. Ezután a migrációs területet planiméter segítségével mérjük. A makrofágok vándorlását a pozitív kontroll csoportban 5% nyúlszérumot, és a vizsgálandó vegyület helyett 5 mmól/1 fukózt tartalmazó RPMI-1640 közegben méijük. A kontroll csoportban a kísérletet csak 5% nyúlszérumot tartalmazó RPMI-1640 közegben végezzük. A migrációs indexet az alábbi képlet segítségével számoljuk ki: migrációs terület migrációs terület a vizsgált csoportban a kontroll csoportban Migrációs index * ------------------------------------------------------------------ x 100 migrációs terület migrációs terület a pozitív kontroll a kontroll csoportban csoportban Az eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. 1. táblázat Alveoláris makrofágok vándorlására kifejtett hatás Vizsgált vegyület Migrációs index 1(T9 mól/1 KT7 mól/1 cisz-2-(4-klór-fenil)-4,5-difenil-imidazolin-hidrogén-klorid (találmány szerinti vegyület) 113,9 142,5 cisz-2,4,5-trisz(4-klór-fenil)-imidazolin-hidrogén-klorid (ismert vegyület)1 0 40,2 cisz-2,4,5-trifenil-imidazolin-hidrogén-klorid (ismert vegyület)2 0 34,2 1: Canadian Journal of Chemistry 50,669 (1972) 2: Merck Index 9, 51 2. kísérlet Plakk-képzö sejtek számának normalizálására kifejtett hatás fokozott immunitású állatban 10 hetes, nőstény BALB/C egérnek (csoportonként 5 állatnak) abdominálisan 1 mg/kg dózisban colchicint adunk és közvetlenül ezután az egérnek abdominálisan 0,1 mg protein/egér dózisban protein-antigént (bentonit-részecskéken abszorbeált 2,4,5-trinitro-benzol (TNP)-piros kürtőscsiga-hemocianint (KHL) adunk. Az antigén beadása után 5 nappal az egereket altatás közben leöljük és a lépsejteket összegyűjtjük. A plakkképző sejtek számát a Drugs under Experimantal and Clinical Research 5(1), 5-10 (1982) irodalmi helyen ismertetett módszerrel számítjuk ki. A colchicinnel kezelt csoportban a plakk-képző lépsejtek száma 129%-os növekedést mutat a kontroll (colchicinnel nem kezelt) csoporthoz képest Ugyanakkor, ha az egereknek orálisan találmány szerinti eljárással előállított cisz-2-(4- -klór-fcnil)-4,5-difenil-imidazolin-hidrogén-kloridot adunk 2 mg/kg dózisban, az antigén beadása előtt két nappal, egy nappal, az antigén beadásának napján, és egy nappal, két nappal, három nappal és négy nappal utána, a fenti módon kezelt csoportban csak 18%-kal növekszik a plakk-képző lépsejtek száma a kontroll csoporthoz viszonyítva. 3. kísérlet Plakk-képző sejtek számának normalizálására kifejtett hatás immunszupresszált állatban 10 hetes nőstény BALB/C egérnek (csoportonként 8 állatnak) abdominálisan antigénként birka vörösvérsejtet tartalmazó oldatot adunk (vándorlást elősegítő anyagként). A vörösvérsejtek száma kb. 5 x 107. Az egereket vízbe merítéssel mérsékelt stresszhatásnak tesszük ki az antigén beadása után négy órával, egy nappal, két nappal, három nappal és négy nappal. Az antigén beadása utáni 5. napon az egereket altatás mellett leöljük, és a lépsejteket összegyűjtjük. Az így kezelt csoportban a plakk-képző lépsejtek száma 47%os csökkenést mutat a vízbe nem merített csoportban mért értékekhez képest. Ugyanakkor, ha az állatoknak orálisan találmány szerinti eljárással előállított cisz-2- -(4-klór-fenil)-4,5-difenil-imidazolin-hidrogén-kloridot adunk 2 mg/kg dózisban az antigén beadása előtt két nappal, egy nappal, a beadás napján, és egy, két, három és négy nappal utána, az így kezelt csoportban csak 6%-kal csökken a plakk-képző lépsejtek száma a vízbe nem merített csoportban mért értékekhez viszonyítva. 1. példa c.isz-2-(4-Klór-fenil)-4j5-difenil-imidazolin előállítása 14,8 ml trietil-amint adunk 16,1 g eritro-l,2-diamino-l^-difenil-etán-diacctát, 13,7 g 4-klór-benzimidsav-etil-észter-hidnogén-klorid és 260 ml etanol elegyéhez és a reakcióelegyet 4 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk. A reakció befejeződése után az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz 77 ml 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot adunk, és az oldatot kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot vízzel mossuk, szárítjuk és az oldószert bepárlással eltávolítjuk. A maradékot metanolból kristályosítjuk. 12,0 g cím szerinti vegyületet kapunk. Hozam: 75%; Olvadáspont 152-153 *C; IR-spektrum v (cnr1): 3200,1619,1595; Hidrogén-klorid-só olvadáspontja: >280 *C; Maleátsó olvadáspontja: 199-200 "C (bomlás); Fumarátsó olvadáspontja: 233-235 *C (bomlás); D,L-laktát olvadáspontja: 143-144'C (bomlás); L-tartarát olvadáspontja: 92- 95 *C (bomlás); Metánszulfonát olvadáspontja: >280 *C. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
