202117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növekedést serkentő hormon stabilitására és stabilizált hormonkészítmény előállítására
HU 202117 B 7 8 polimerek; polivinil-acetát, a polivinil-acetát keresztkötéses homo- és kopolimerjei; az akrilsav és metakrilsav keresztkötéses poliészterei, a polivinilalkil-éterek, a polivinil-fluorid, szilikon, polikarbonát, poliuretán, poliamid, poliszulfonok, poliimi- 5 dek, poliolefinek, polibenzimidazolok; a sztirén akrilonitril kopolimerek, a keresztkötéses poli(etilénoxid), a polialkilének, poli(vinil-imidazol), poliészterek, klórszulfonált poliolefinek, és etilén/vinilészter kopolimerek, mint amilyen az etilén/vinil- 10 acetát kopolimer. Előnyös anyag a szilikon. Az elmondottakat az alábbiakban példákon szemléltetjük. A példák kizárólag szemlél tető célzatúak és a találmány oltalmi körét nem korlátozzák. 15 1. példa pH - 7,3 kémhatású, izotóniás fiziológiai foszfátpuffert készítünk nátrium-hidrogén-foszfátokból és 0,2%-ban nátrium-azidot adunk hozzá. Ebben a puff erben készítjük el azl. táblázatban fel tűn- 20 tetett stabilizátorok oldatát. 50 milliliteres steril centrifugacsövekbe 40-40 mg borjú növekedéshormont mérünk és 100 (xl oldattal megnedvesítjük. A csöveket 37 °C hőmérsékleten tartjuk. Miután a táblázatban megadott ideig 37 °C hőmérsékleten 25 tartjuk az anyagokat, valamennyit az alábbiak szerint kezeljük. A csövekbe 40 ml izotóniás fiziológiai foszfátpuffert (1. fent) mérünk (innen számítjuk az 7. táblázat Készít- alkalmazott stabilitázor stabili- nap oldódási oldhatatlan mény borjú növeke- zátor idő (óra) maradéka dési hormon tömeg%-a kiindulási az oldatban hormon tömeg%-ában kifejezve 1. Lot 7500(1) szaccharóz 5 22 1,6 39 + 2. Lot 7500(1) szaccharóz 16 21 1,5 20 3. Lot 7500(1) szaccharóz 50 20 1,3 6 4. Lot7237C szaccharóz 50 15 2,5 5 + + 5. Lot 7237C mannitol 15 19 1,7 20 +(<) 6. Lot 7500(1) mannitol 15 20 2,3 21 7. Lot 7500(1) szorbitol 50 20 1,3 6 + 8. Lot7237C szorbitol 50 19 1,7 9 + + 9. Lot 7237C szorbitol 41 20 1,5 5 (+) 10. Lot 7237C laktóz 15 19 1,5 12 + + 11. Lot 7237 laktóz 52 20 1,5 5 +(<) 12. Lot 7500(1) Ficoll 24 21 1,5 26 13. Lot 7237C Ficoll 19 19 2,6 23 + 14. Lot 7500(1) glicerin 51 19 0,75 17 + 15. Lot7237C glicerol 51 19 1,5 10 + + 16. Lot 7500(1) glicin 5 22 1,6 35 17. Lot 7500(1) glicin 15 22 3,0 19 18. Lot 7500 glicin 15 17 2,3 13 19. Lot 7500(1) glicin 15 17 2,3 14 20. Lot7237C glicin 15 19 1,5 16 + + 21. Lot 7237C glicin 15 20 1,5 16 22. Lot 7237C szarkozin 5 20 1,7 46 23. Lot 7237C szarkozin 15 20 1,7 31 24. Lot 7237C szarkozin 30 20 1,7 8 + 25. Lot 7237C szarkozin 30 20 1,7 12 26. Lot 7237C szarkozin 40 20 1,7 11 27. Lot7237C poli-DL-lizin. 29 19 1,5 16 RRA Hypox patkány növekedés oldódási időt) és egy csészealakú szonikítort használva az anyagot hatékonyan szuszpendáljuk, illetve oldjuk. Ezt követően a kapott szuszpenziót, mialatt szobahőmérsékleten áll, vortexoljuk. Az illető csövet öt percig 1900 g értéken centrifugáljuk, ez jelenti az oldódási idő végét. Amennyire lehet a felülúszót pipettával leszívjuk, és a nem oldódott maradékot 20 ml vízben szuszpendáljuk. Az újbóli centrifugálás és a felülúszó eltávolítása után a csőben levő maradékot szobahőmérsékleten Savan Speed Vac Concentrator készülékben szárítjuk, melyben a végső kamranyomás 2Pa. Apelletált száraz maradékot eltávolítjuk a csőből, és a súlyát meghatározzuk az üres cső újbóli lemérésével. Az alábbi táblázatokban megadjuk az egyes készímtényeknél a „radio receptor assay” (RRA) és a hypox növekedési teszt eredményeit. A „+” jel lényegében 100%-os aktivitást jelent a borjú növekedési hormon standardhoz viszonyítva, a jel azt jelenti, hogy nincs, vagy kicsi az aktivitás, a jel köztes aktivitási szintet jelez. Két jel közbenső aktivitásra utal. A példákban Parlow által tisztított agyalapi növekedési hormonok szerepelnek Lot 7500(1), Lot 7237C Lot8096C és 7500 jelöléssel, melyeket A.F.Parlowtól szereztünk be (University of California, School of Medicine, Harbor General Hospital, Forrance, California, USA). 5
