202112. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként 5-szubsztituált pirimidin-nukleozidot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU202112B 13 14 1000 mg/pesszárium A fenti komponenseket közvetlenül összekeverjük és közvetlen préseléssel pesszáriumot készítünk. 5 Vírus elleni hatás és toxicitás mérése Humán citomegtalovírust (HCMV) vizsgálunk egyrétegű MRC5 sejteken (humán embrió tüdősejtek) vagy Detroit 532 sejteken (humán fityma kötőszöveti sejtek). A hatóanyag aktivitását a vértestek 10 számának csökkenésével vizsgáljuk, amelynek során az egyrétegű sejtet HCMV szuszpenzióval fertőzzük, majd a vírusnak a tenyészeten történő elterjedésének megakadályozására gélformájú agaróz táptalajjal fedjük le. Különböző koncentrációjú ha- 15 tóanyagot adagolunk a felső agaróz tápréteghez. A vértestek számát minden hatóanyagkoncentrációnál akontroll százalékában fejezzük ki és dózisfüggő görbén ábrázoljuk. Erről a görbéről az 50%-os gátló hatáshoz szükséges koncentrációt (IC50) határoz- 20 zukmeg. MRC5 sejteken hasonló módon varicella zoster vírust (VZV) vizsgálunk, azzal a különbséggel, hogy az agaróz fedőréteget elhagyjuk. A következő vizsgálathoz vírustermelő sejteket 25 (P3HR-1) 14 napon keresztül a hatóanyaggal kezelünk, majd a se j tenkénti EBV genom másolat számát EBV specifikus c-RNS-DNS hibridizációval határozzukmeg.Nonoyama és Paganomódszerével (Nature: New BiologyVol. 233,103-104/1971/)Epste- 30 in-Barr vírust vizsgálunk. A megadott IC50 értékek az EBV genom sejtenkénti számának 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt jelölik. Sejttoxickárt vizsgálunk a sejt fejlődés gátlásának mérésével. Verő sejtek egybefüggő tenyészetét 35 különbözőkoncentrációj ú hatóanyaggal kezeljük és a sejtek életképességét naponta vizsgáljuk tetrazólium festés (MTT) segítségével. A sejtek életképességének 96 órán keresztül történő 50%-os csökkenéséhez szükséges koncentrációt CCID50 érték alakjában adjuk meg. A mérési eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza: Ható IC50(pM) CCIF50(|xM) anyag VZV IC50(|xM) 96 óra ICso(pM) példa- HCMV alatt EBV száma 1. 1,0 16 500 2 3. 1,5 20 300 0,1 SZABADALMI IGÉNYPONT Eljárás hatóanyagként (I) általános képletű 5- szubsztituált pirimidin-nukleozidot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, a képletben R: jelentése oxocsopor t vagy iminocsoport, 2 J R jelentése hidrogénatom vagy metücsoport, R4 jelentése hidrogénatom vagy hidroxilcspport, azzal a megszorítással, hogy a) R1 jelentése oxocsoport ésR4 jelentése hidrogénatom, ha Rz jelentése metilcsoport, vagy b) R4 jelentése hidroxilcsoport, ha R^jelentése hidrogénatom és R1 jelentése oxocsoport, azzal jellemezve, hogy az ismert módon előállított (I) általános képletű vegyületet gyógyszerészeti célra alkalmas hordozóanyaggal és egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük, és a keveréket varicella zoster vírus, cytomegalo vírus vagy Epstein Barr vírus által okozott fertőzés kezelésére alkalmas készítménnyé alakítjuk. 8
