201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 201954B lünk, majd hozzzáadunk 2000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 24001.U. purin-nukleozid-foszforilázt és a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 3 nap elteltével a reakciókeveréket - 20 ”C hőmérsékleten tároljuk, majd felengedés után szűrjük és a szűrletet Dowex-l-hidroxid töltetű oszlopon (2,5x10 cm) kromatograf áljuk, az eluálást 90%-os metanol/víz eleggyel végezve. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot kétszer BioRad P-2 töltetű oszlopon (5x90 cm) kromatografáljuk, az eluálást 30%-os n-propanol/víz eleggyel végezve. A terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, majd liofilizáljuk, amikoris 0,391 g cím szerinti vegyületet nyerünk 0,1 hidrát-tartalommal. Elemanalízis a C11H15N5O2.0,1 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 52,62, H: 6,10, N: 27,89%, mért: C: 52,75, H: 6,16, N: 28,01%. 20. példa szerint nyert vegyület NMR adatai: 1 H-NMR (200 MHz, DMSO-dó): 5 8,59 és 8,47 (2s, 2H, H2 és Hg), 6,30 (dd, 1H, J=4,2Hz, Hí), 4,95 (t, 1H, J-5.5HZ, OH5,), 4,36 (d, 2H, J-7,3 OCH2), 4,12 (m, 1H, H4,), 3,54 (m, 2H, H5, és H5"). 2,42 (m, 2H, H2, és H2”), 2,03 (m, 2H, H3, és H3”), 1,32 (m, 1H, CH), 0,58 és 0,39 (2m, 4H, 2CH2). 27. példa szerint nyert vegyület NMR adatai: ‘H-NMR (200 MHz, DMSO-de): 5 8,32 és 8,18 (, 2H, H2 és Hg), 7,79 (b, 1H, NH), 6,20 (m, 1H, Hí,), 5,28 (m, 2H, CH), 5,03 (t, 1H, J=5,5,5’OH), 4,09 (m, 4H, CH2 és H4,), 3,59 és 3,51 (m, 2H, 5’CH2), 2,38 (m,2H,2’CH2),2,10(m,2H,3’CH2), 1,68 és 1,65 (s, 6H.2CH3). 42. példa 6-(Benzil-oxi)-9-/(2R,5S)-tetrahidro-5-(hidrox i-metil)-2-f uril/-9H-pur in 0,5 g (2,2 mmól) 6-benzil-oxi-9H-purint feloldunk 5 ml N,N-dimetil-formamid és 5 ml dimetüszulfoxid elegyében, hozzáadunk 0,62 g (2,8 mmól) 3’-dezoxi-timidint és 0,04% kálium-azidot tartalmazó K-foszfát puffert (32 ml, 10 mmólos), majd 8 ml DEAE cellulózon abszorbeált 16000 I.U. mennyiségű purin-nukleozid-foszforilázt és 8000 I.U. timidin-foszforilázt (Krenitsky, TA. és mtársai: Biochemistry 20.3615.1981 és 4.381.444. számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás) adagolunk, a pH-t ecetsavval 6,8-ra beállítjuk és az elegyet vízfürdőn 37 “C hőmérsékleten rázatjuk. 7 óra elteltével a keveréket szűrjük, metanollal addig mossuk, amíg ultra-ibolya fényt abszorbeáló anyagtól mentes lesz, majd vízzel kb. 10% szerves oldószertartalomig hígítjuk. Az így nyert anyagot ezután kromatografáljuk, először AG1-X2 (2,5x10 cm, OH*) töltetű majd XAD-2 (2,5x20 cm) töltetű oszlopon. Ezután az oszlopokat 700 ml vízzel átmossuk, majd a terméket metanollal eluáljuk, az eluátumot betöményítjük, a visszamaradó anyagot flash kromatografáljuk (szilikagél, etil-acetát/metanoU 95/5). Liofilizálás után 0,339 g 6-(benzil-oxi)-9- ((2R,5S)-tetrahidro-5-(hidroxi-metil)-2-furil]-9H -purint nyerünk, op.: 87 °C. Elemanalízis a C17H18N4O3.0,05 H2O összeg-23 képletű vegyületre: számított: C: 62,39, H: 5,57, N: 17,12%, mért: C: 62,36, H: 5,61, N: 17,08%. Az1 H-NMR és tömegspektrometriai adatok igazolják a vegyület szerkezetét. 43. példa 6-(N-Ciklopropü-N-metü-amino)-9-[(2R,5S)-t etrahidro-5-((pivaloil-oxi)-metil)-2-furüj-9H-pur in 0,322 g (1,1 mmól) 6. példa szerinti 6-(N-ciklopropil-N-metil-amino)-9-[(2R,5S)-tetrahidro-5- (hidroxi-metü)-2-furü]-9H-purint 50 ml acetonitrilben feloldunk, hozzáadunk 10,5 mg (0,1 mmól) 4- (dimetil-amino)-piridint (Aldrich Chemical Co., Madison WI) és 620 pl (4,4 mmól) trietü-amint (Aldrich Chemical Co., Madison WI), majd a lombikot jégfürdőn lehűtjük. Ezután 450 pl (2,2 mmól) (Aldrich Chemical Co.) pivalinsav-anhidridet feloldunk 10 ml acetonitrilben és cseppenként 15 perc leforgása alatt az elegyhez adagoljuk, majd szobahőmérsékleten keverjük. Ezután 620 pl (4,4 mmól) trietü-amint és 250 pl (2 mmól) pivaloü-kloridot adagolunk még 24 óra, 48 óra, 72 óra és 96 óra elteltével, majd 120 órán át keverjük az elegyet és ezután még egy további 500 pl (4 mmól) pivaloü-kloridot és 1,24 ml (8,8 mmól) dietü-amint adagolunk hozzá és 16 órán át visszafolyatás mellett melegítjük. Areakciót ezután metanoüal leállítjuk, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot 25 ml etü-acetátban szuszpendáljuk és a kapott sót szűréssel elválasztjuk. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a visszamaradó anyagot kromatografáljuk (Chromatotron, 2 mm-es szilikagél lemez, hexán/aceton- 7/3). A kívánt terméket tartalmazó frakciót ezután tovább tisztítjuk szüikagél kromatografáló oszlopon (diklór-metán/metanol- 98/2). A terméket ezután liofüizáljuk, amikoris 0,218 g 6- (ciklopropü-metü-amino)-9-[(2R,5S)-tetrahidro- 5-((pivaloil-oxi)-metil)-2-furil]-9H-purin-t nyerünk (52%) olajos anyag formájában. Analízis adatok Ci 9H27N5O3.0,25 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 60,38, H: 7,33, N: 18,53%, mért: C: 60,49, H: 7,33, N: 18,38%. NMR adatok: 1 H-NMR (200 MHz, DMSO-dö) 8:8,26 (látszólagos szinglett, 2H, H2 ésHs), 6,25 (m, 1H, Hí,), 4,25 (b, 1H, H4,), 4,16 (m, 2H, H5, és H5), 3,36 (s, 3H, NCH3), 3,21 (b, 1H, N-CHCH2CH2), 2,48 (b, 2H, H3, és Hr), 2,11 (m, 2H, H2 és Hr), 1,08 (s, 9H, C(CH3)3), 0,84 és 0,70 (2m, 2H mindegyik, NCHCH2CH2). 44. példa 9-[(2R,5S)-5-(Acetoxi-metü)-tetrahidro-2-furi l]-6-(ciklopropü-metü-amino)-9H-purin 0,290 g (1 mmól) 6-(ciklopropü-metü-amino)-9- [(2R,5S)-tetrahidro-5-(hidroxi-metü)-2-furü]-9H -purint 10,2 mg (0,1 mmól) 4-(dimetü-amino)-piridint és 620 pl (4,4 mmól) trietü-amint 50 ml acetonitrilben feloldunk, a lombikot jégfürdőn lehűtjük és 150 pl (2,1 mmól) acetü-kloridot adagolunk hozzá. A kapott keveréket négy órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd további 620 pl (4,4 mmól) trie-24 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
