201843. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és eszköz antibiotikus hatású gátlóanyagok maradékai és egyéb kemikáliák jelenlétének meghatározására
HU 201843 B vagy hasonló nagyságú tenyésztő palackban, miután a pH-t 7,2-re állítottuk be. Sterilezés 1,013 x 105 Pa 20 perc. 7 Mueller-Hinton agar Tryptone Oxoid 175 g Burgonyakeményítő vízoldható 15g ”Lab-Lemco” húskivonat 30g agar-agar SO BI GÉL 140 g pH: 7,6 Letöltés 350 ml-ként gyógyszerüvegbe. Autoklávozás 1,013 x 105 Pa 20 perc. A táptalajok elkészítése: 7,5 liter 60-80 °C-os ionmentes vízben a fenti sorrendben oldjuk az összetevőket; teljes oldódás után 101-re kiegészítjük. Az így kapott 20%-os nátrium-hidroxid oldattal a receptúrában megadott értékre állítjuk be. A szűrést a letöltés illetve az agar-agar hozzáadása előtt vattán és szolnoki krepp szűrőpapíron keresztül végezzük. A gyógyszerüvegeket műanyag kupakokkal, az 11-es tenyésztő palackot vattadugóval zárjuk és a fentiekben megadott értékeken sterilezzük. A táptalaj készítésénél leírtak szerint készül az indikátor oldat is. Brillantfekete Chroma 1B 085 1,8 g Glicerin vt. B minőség 260 ml MnCh oldat 1%-os 130 ml desztillált víz ad 1000 ml Letöltés üvegekbe 5 ml-ként. Sterilezés áramló gőzben 40 perc 0,2026 x 105 Pa C) A találmány szerinti diagnosztikai eszköz (ampulla) elkészítése Az igénynek megfelelő számú Nouws levest oltunk teszt baktériumszuszpenzió nyerése céljából. A baktériumszuszpenzió t az előzőek szerinti számú üvegnyi, felolvasztott és 63 #C-ra visszahűtött Mueller-Hinton táptalajjal + üvegenként 5 ml brillantfekete indikátor oldattal elegyítjük. Az egységesített baktérium—táptalaj—indikátor szuszpenziót 63-65 fokra beállított vízfürdőbe helyezzük és a sterilitás szabályainak betartásával Vornwall fecskendő segítségével 2 ml-ként 4 ml-es fiolákba osztjuk szét. Az üveg fiolákat gumisapkával és alumínium kupakkal sterilen zárjuk. LA liofilizett spóraszuszpenzió ellenőrzése spórafestéssel A lio-ampulla tartalmát steril körülmények között 2 ml Nouws levesben reszuszpendáljuk, majd 3 oltókacsnyi mennyiséget tárgylemezre viszünk és szélesztjük. Száradás után Bunsen égő lángján 3x-i áthúzással rögzítjük a kenetet és megfestjük az alábbi módon: 5%-os vizes malachit zöld oldattal fedjük a kenetet és 20 másodpercig Bunsen égőn aluliról gőzölésig melegítjük; 30 másodpercig állni hagyjuk, majd desztillált vízzel öblítjük. A kontraszt festést 3%-os vizes szafranin-oldattal (Reanal katalógus szerinti, mikroszkópiái célra szolgáló színezék) végezzük 1 percig. Az újabb desztillált vizes öblítést követő szárítás után a készítményt mikroszkóppal, annak immerziós objektívját használva, 600-800- szoros össznagyítás mellett megvizsgáljuk. 600- 800-szoros nagyításnál jónak tekintjük a készítményt, ha látóterenként 50 spóra (élénkzöld) jelenléte kimutatható. 2. A liofilezett spóraszuszpenzió ellenőrzése tenyésztéssel A spóraszuszpenziót a Nouws levesben elszaporítva a Mueller-Hinton agarral és a brillantfekete festékoldattal elegyítve inokulum-táptalaj lemezeket készítünk. Megfelelő a spóraszuszpenzió, ha a Nouws levesben 64 °C-on 4 óra alatt zavarosodást és kezdődő üledék képződést vált ki, a vele készített sötétkék lemezek színe 5 órán belül sárgára változik. 3. A készlet egészének ellenőrzése Megfelelő a készlet, ha a 10 NE/1 (0,01 NE/ml) penicillin koncentráció 2 mm-nél szélesebb gátlási zónát hoz létre. 8 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás antibiotikus hatású gátlóanyagok maradékai és egyéb kemikáliák jelenlétének meghatározására, melynek során a vizsgálandó folyadék mintáját brillantfekete festékoldattal kékre színezett — célszerűen Mueller-Hinton — táptalajra a gátlóanyagok iránt nagyon érzékeny baktérium, célszerűen Bacillus stearothermophylus var. calidolactis C 953 nevű és jelű teszttörzset (DSM1550) juttatunk, adott esetben—előnyösen szobahőmérsékleten végzett—diffundáltatás után—célszerűen 63 ± 2 °C hőmérsékleten 2,5-4 órán át inkubálást végzünk, majd a vizsgálatot kiértékeljük, azzal jellemezve, hogy a teszttörzset spóraszuszpenzió formájában alkalmazzuk, a tesztanyagot a vizsgálat előtt 63 ± 2 °C-on, előnyösen 2 órán át előinkubáljuk, az inkubálást megelőző diffundáltatást pedig előnyösen 30 percig, szobahőmérsékleten végezzük. 2. Eszköz antibiotikus gátlóanyagok jelenlétének meghatározására, azzal jellemezve, hogy átlátszó edényben elhelyezett, kocsonyás állagú, elkészített brillantfekete festékoldattal kékre színezett Mueller-Hinton táptalajt tartalmaz, amely betöltése előtt egy a gátlóanyagok iránt nagyon érzékeny baktérium, célszerűen bacillus stearothermophylus var. c.alidolactis C 953 nevű és jelű teszttörzs (M 1550) spóráival lett keverve. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 5
