201806. lajstromszámú szabadalom • Eljárás géntechnológiai uton módosított mikroorganizmusok által termelt tisztított növekedési hormon kinyerésére
HU 201806 B hang-berendezésben, 65% erősséggel. Az áramlási sebesség az ultrahangos berendezésen át 18 liter/őra. Az ultrahanggal kezelt zagyot CEPA 101 berendezésen centrifugáljuk 30 liter/óra sebességgel. Az összes centrifugálási körülmény a betáplálási sebesség kivételével azonos azzal, amelyet a sejtkinyerésnél alkalmazunk. A bemenő bGH mintegy 3%-át tartalmazó felülúszót eldobjuk. Az üledék, amely 3,07 kg-ot nyom (75% nedvesség), tartalmazza az aggregált bGH-t, ezt megőrizzük. Lizozim puffer (50 mmól/liter Trisz és 50 mmól/liter EDTA pH 7,4): 6,06 Trisz-t és 14,6 g EDTA-t tartalmazó oldatot (750 ml ionmentesített vízben) pH 7,4-re állítunk be tömény sósavval vagy 50%-os NaOH oldattal, 1 literre hígítjuk ionmentesített vízzel és ha szükséges, újra beállítjuk pH 7,4-re. Mérési módszerek: mennyiségi gél-letapogatás a felülúszóból és az üledékből. A lépés kitermelése: 97%. Összesített kitermelés: 87,3% Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenziótérfogat 0,61%-a Számított vizsgálat: 61,9 g bGH/kg üledék Dúsítási tényező: 1,7 5. példa Első mosás A lizozimes lépésből (4. példa) nyert nedves üledéket (3,07 kg) az eredeti kinyert nedves sejt kilogrammjaira számítva 0,6 liter 20 mmól/literes Trisz-pufferben (pH 7,4) szuszpendáljuk (összesen 6,8 literben). Politron nagy nyíróerőt biztosító keverő segítségével diszpergáljuk az üledéket. A zagyot ultrahang-kezelésnek vetjük alá 181/óra áramlási sebességnél Heat Systems 370 wattos modell berendezésen át 65% erősségnél. Az ultrahanggal kezelt zagyot CEPA 101-ben centrifugáljuk 30 liter/óra sebességgel. Az összes centrifugálási körülmény a betáplálás! sebesség kivételével azonos a sejt-kinyerésnél alkalmazottakkal. A felülúszót eldobjuk. Az üledéket, amely az aggregált bGH-t tartalmazza, és 2,46 kg-ot nyom (75% nedvesség), megőrizzük. Első mosó-puffer (20 mmól/liter Trisz, pH 7,4): 2,42 Triszt (750 ml ionmentesített vízben beállítunk pH 7,4-re tömény sósavval, ionmentesített vízzel 1 literre hígítjuk, és ha szükséges, a pH-t újra beállítjuk 7,4-re. Mérési módszerek: mennyiségi gél-letapogatás a felülúszóból és az üledékből. A lépés kitermelése: 100%: Összesített kitermelés: 87,3% Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenziótérfogat 0,49%-a Számított vizsgálat: 77,3 g bGH/kg nedves üledék Dúsítási tényező: 1,2 6. PÉLDA Sós mosás Az első mosási lépésből (5. példa) származó üledéket 2,46 kg) az eredeti kinyert nedves sejt kilogrammjaira számítva 0,6 liter 50 mmól/liter Triszt és 100 mmól/liter NaCl-t tartalmazó pufferben szuszpendáljuk (összesen 6.8 literben). Polit-11 ron nagy nyíróerőt biztosító keverő segítségével diszpergáljuk az üledéket. A zagyot ultrahang-kezelésnek vetjük alá 18 liter/óra áramlási sebességnél Heat Systems 370 wattos modell berendezésen át 65%-os erősségnél. Az ultrahanggal kezelt zagyot CEPA 101-ben centrifugáljuk 301/óra sebességgel. Az összes centrifugálási körülmény a betáplálási sebesség kivételével azonos a sejtkinyerésnél alkalmazottakkal. A felülúszót eldobjuk. Az üledéket, amely az aggregált bGH-t tartalmazza és 2,15 kg-ot nyom, (75% nedvesség) megőrizzük. Sós mosó puffer (50 mmól/liter Trisz és 100 mmól/liter NaCl, pH 7,4): 6,06 g Triszt és 5,85 g nátrium-kloridot (750 ml ionmentesített vízben) pH 7,4-re állítunk be tömény sósavval, 11-re hígítjuk ionmentesített vízzel, és ha szükséges, a pH-t újra beállítjuk 7,4-re. Mérési módszerek: Mennyiségi gél-letapogatás a felülúszóból és az üledékből. A lépés kitermelése: 99%. Összesített kitermelés: 86,4% Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenziótérfogat 0,38%-a Számított vizsgálat: 99,0 g bGH/kg üledék Dúsítási tényező: 1,12 8. PÉLDA Második vizes mosás Az első vizes mosási lépésből (7. példa) származó nedves üledéket az eredeti kinyert nedves sejt kilogrammjaira számítva 1,2 liter ionmentesített, pirogén-mentes vízben-szuszpendáljuk (összesen 13,7 liter vízben). Politron nagy nyíróerőt biztosító keverő segítségével diszpergáljuk az üledéket. A zagyot ultrahang-kezelésnek vetjük alá 18 1/óra áramlási sebességgel Heat Systems 370 wattos modell berendezésen át 65% erősségnél. Az ultrahanggal kezelt zagyot azután CEPA 101-ben centrifugáljuk 30 liter/óra áramlási sebességnél. Az összes centrifugálási körülmény a betáplálási sebesség kivételével azonos a sejtkinyerésnél alkalmazottakkal. A felülúszót eldobjuk. Az üledéket, amely 1,31 kg-ot nyom (75% nedvesség) és tartalmazza az aggregált bGH-t, megőrizzük. Méréisi módszerek: Mennyiségi gél-letapogatás a felülúszóból és az üledékből. A lépés kitermelése: 99% Összesített kitermelés: 85,6% Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenziótérfogat 0,26%-a Számított vizsgálat: 160 g bGH/kg üledék Dúsítási tényező: 1,62 9. PÉLDA Feloldási lépés A második vizes mosási lépésből (8, példa) származó nedves üledéket (1,31 kg) a mosott üledék kilogrammjaira számítva 25 liter ionmentesített, pirogén-mentes vízben szuszpendáljuk (összesen 32,6 literben). Politron nagy nyíróerőt biztosító keverő segítségével diszpergáljuk az üledéket. A pH-t lassan 11,8-ra állítjuk be 10 n NaOH hozzáadásával. Az aggregált bGH 1 óra alatt lassan feloldódik. Az oldatot 1 óra hosszat inkubáljuk, majd 1 mól/literes nátrium-borát oldatot (pH 11,8) adunk hozzá 12 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
