201802. lajstromszámú szabadalom • Hatóanyagként bacillus thuringiensis hibridsejteket tartalmazó peszticid készitmény és eljárás a hibridsejtek előállítására
HU 201802 B ^ ß-plazmiddal (a konjugációs példában való alkalmazás szerint) p2' tetraciklin-rezisztens törzs (a konjugációs példában való alkalmazás szerint) ' ' Ezt a keveréket úgy állítottuk elő, hogy közvetlenül a permetező kijuttatás előtt kurstakr1) és tenebrionis^ törzset egyenlő aránjfoan szuszpendáltunk, majd a szuszpenzió összkoncentrációját 108 spóra/ml értékre állítottuk be. 5 6 A fentiekben ismertetett néhány hibridtörzset 1985. október 15-én az .^Agricultural Research Culture Collection (NRRL)” gyűjteményben (Peoria, Illinois 61604, USA) letétbe helyeztük. Az L21004, L21017 és L21019 törzsek a B-18011, B-18012, illetve B-18013 NRRL-sorszámot kapták. A fenti táblázat adatai azt mutatják, hogy az L21001, L21004, L21006, L21017 és L21019 hibridek nemcsak azon rovarfajták ellen hatásosak, amelyek az anyatörzsekkel szemben érzékenyek, hanem - meglepő módon - hatásuk olyan rovarfajtákra, például a Spodoptera fajra is kiterjed, amelyek az anyatörzsekkel szemben nem érzékenyek. Ezek az eredmények különösen azért meglepők, mert az anyatörzseket tartalmazó egyszerű keverék kevésbé aktív a Phaedon-nal szemben, mint a tenebrionis törzs önmagában, és Spodoptera-ra hatástalan. A találmány körébe tartozik az a módszer is, amelynek segítségével rovarok leküzdhetők olyan módon, hogy a rovarokra vagy azok tartózkodási helyére egy találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrid inszekticid szempontból hatásos mennyiségét jutatjuk. A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibrideket célszerűen inszekticid készítmény - például szuszpenziós koncentrátum vagy por - alakjában alkalmazzuk. Az ilyen készítmények célszerűen hígítószereket és előnyösen további, inszekticid hatás szempontjból elfogadható adalékokat - például az ultraibolya fénnyel szemben védő szereket, felületaktív szereket, emulgeálószereket - tartalmaznak. Ezeket a készítményeket a szokásos módon készítjük, amint ez a B. t. törzseket tartalmazó, biológiai inszekticid szerek esetében ismeretes. Az alkalmazott hígítószerek folyékony vagy szilárd, mezőgazdasági szempontból elfogadható anyagok lehetnek, amelyeket a B. t. hibridekhez adhatunk azzal a céllal, hogy azokat könnyebben vagy kedvezőbben kijuttatható alakba hozzuk, illetve a hatóanyagot úgy hígítjuk, hogy a hatás erőssége alkalmas vagy a megkívánt mértékű legyen. Könnyen belátható, hogy a találmány szerint konjugációval kapott B. t. hibridek a továbbiakban gazdaságosabban reprodukálhatók és szaporíthatók nitrogénforrást (például hallisztet), szénhidrátforrást (például keményítőt) és ásványi sókat tartalmazó, körülbelül 7-es pH-értékű táptalajon végzett fermentációval. E fermentációt célszerűen 20 és 40 °C közötti hőmérséklet-tartományban, például 30 °C hőmérsékleten végezzük. A fermentáció kedvező időtartama 24-72 óra, például 36 óra. A találmány szerinti eljárással előállított B. t. hibridekből célszerűen úgy készítünk szuszpenziós koncentrátumot, hogy a fermentációs folyadékot a kívánt töménységig bepároljuk, majd kívánt esetben a maradékhoz adalékanyagot adunk. Hasonló módon állíthatunk elő nedvesíthető porkészítményt úgy, hogy a fermentációs folyadékot adott esetben ultraibolya sugárzással szemben védő anyagok, emulgeálószerek és más adalékanyagok hozzáadása után permetszárításnak vetjük alá, majd az így kapott szilárd anyagot porítjuk. Az így kapott készítmények a hígítószerként alkalmazott tenyésztőközeg komponenseinek jelentős részét tartalmazzák. Eljárhatunk úgy is, hogy a fermentációs folyadékot centrifugáljuk, így a táptalaj nagyobb méretű részecskéit elkülönítjük, majd a fentiek szerint megfelelő szuszpenziós koncentrátummá vagy nedvesíthető porkészítménnyé alakítjuk. Az előnyös készítmények a formulázott termék 1 mg-jára vagy ml-ére számítva például 1000-40000 NE hatóanyagot tartalmaznak. Oldható koncentrácum előállítása Körülbelül 1,86% cukormelaszt, 1,4% olajmentes gyapotmag-fehérjelisztet, 1,7% kukoricalé-szilárdanyagot és 0,1% kalcium-karbonátot tartalmazó vizes táptalajt állítunk elő, a pH értékét 7,2-7,6- ra állítjuk be, az így kapott terméket 20-30 percig 121 °C hőmérsékleten sterilizáljuk, majd térfogatára számítva 5% B. t. hibriddel eltoljuk. A tenyésztést keverés közben, 34,5 kPa nyomáson, 30 °C inkubációs hőmérsékleten végezzük. A fermentációs folyadékot ekkor 18-20 °C-ra hűtjük, és a pH értékét tömény kénsavval 5,5-re állítjuk be. Ezután a folyadékot 0,105 lyukbőségű szűrőn átszűrjük, a szűrt tenyészetet centrifugáljuk a szennyezések egy részének az eltávolítása céljából, majd a kívánt koncentrációjú térfogatra töményítjük. A koncentrátumhoz 0,4 tömeg% emulgeálószert [például izooktil-fenil-poli(oxi-etanol)-t] és 0,8 tömeg% ultraibolya fényt elnyerő szert adunk. Nedvesíthető por előállítása A fentiekben leírt, bepárolt koncentrátumot permetezve szárítjuk, és az így kapott, technikai minőségű koncentrátumot olyan „vivőanyagkeverékkel” keverjük, amely 10% szilícium-dioxidból és 90% szójababfehérjéből áll. A vivőanyagkeverék mennyisége a technikai koncentrátum hatáserősségétől és a nedvesíthető por kívánt hatáserősségétől függ. Ehhez a nedvesíthető porhoz 0,4 tömeg% emulgeálószert és 0,8 tömeg% ultraibolya fényt elnyelő szert adhatunk. A találmány szerinti eljárással előnyösen olyan B. t. hibrideket állíthatunk elő, amelyeket befogadó törzsként B. t. tenebrionis és donortörzsként B. t. kurstaki konjugációval kaptunk. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
