201800. lajstromszámú szabadalom • Eljárás t-PA és SCU-PA termelésének növelésére
HU 201800 B 9 10 IIB TÁBLÁZAT (folyt.) t-PA termelése ECGF-fel, heparinnal, és ECGF/heparinnal különböző koncentrációknál Tápközeg 7 16 Idő (órák) 25 30 42 t-PA (ng/üreg) 50 62 23.180 jig Hep + 50 pg ECGF 12 76 95 116 170 221 312 A ül. Táblázat a Bowes melanóma sejtek által nóma sejtek a tisztított t-PA eredeti forrásai (ezetermelt t-PA és SCU-PA termelését mutatja be két a tanulmányokat hasonló módon hajtjuk végre, ECGF-fel (50 pg/ml) és heparinnal (90 pg/ml) mint az I. Táblázat szerinti eljárásban), kombinációban, vagy ezek nélkül. A Bowes mela-III. TÁBLÁZAT t-PA és SCU-PA termelése Bowes melanóma sejtekkel ECGF/heparin faktorokkal vagy ezek nélkül Tápközeg 6 12 Idő (óra) 24 48 ■ t-PA (ng/ml) 72 96 faktorok nélkül 15 25 65 140 215 225 + ECGF/Hep 15 40 95 160 195 180 SCU-PA (ng/ml) faktorok nélkül 0a 0 0 0 0 0 + ECGF/Hep 0 0 0 0 0 0 0 a kimutathatatlanságot jelenti, azaz kisebb értékeket, mint a mérés érzékenysége (mintegy 1 ng) Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a Bowes melanóma sejtek csak t-PA-t termelnek, amelynek szintje lényegében azonos marad ECGF/heparin hozzáadásával a tenyésztő tápközeghez, vagy anélkül. Az alábbi IV. Táblázat bemutatja mint t-PA, mind SCU-PA termelését WI-38 sejtekkel ECGF- fel és heparinnal kombinációban (50 mcg/ml, illetve 90 mcg/ml), vagy ezek nélkül. IV. TÁBLÁZAT t-PA és SCU-PA termelése WI-38 sejtekkel ECGF/heparin faktorokkal, vagy ezek nélkül Tápközeg 3 Idő (nap 4 t-PA (ng/ml) 5 6 faktorok nélkül 45 30 25 30 + ECGF/Hep 365 510 495 590 faktorok nélkül 0 0 0 0 + ECGF/Hep 240 335 300 320 Ezek az eredmények megalapozzák, hogy az ECGF és heparin kombinációjának hozzáadása humán fibroblaszt sejttenyésztő tápközeghez lényegesen növeli mind t-PA, mind SCU-PA termelését. Az alábbi V: Táblázat a t-PA termelését mutatja be a két faktorral (ECGF és heparin) vagy azok nélkül a tápközeg visszavezetésével, gördülő palackokat alkalmazva. Az alkalmazott szövettenyészet 55 WI-38/TC27. Az első ciklusban a tenyészetet 10%os szérumos tápközegben növesztjük. Ezt mosással eltávolítjuk és szárummentes tápközeggel (RPMI) helyettesítjük a fenti faktorokkal, vagy azok nélkül (az ECGF koncentráció 50 pg/ml, és a heparin- 60 koncentráció 90 pg/ml). A bemutatott adatok a szérummentes tápközegben egymást követő ciklusok napja szerint vannak feltüntetve. 6
