201678. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán retrovírus elleni 3'-azido-3'-dezoxitimidin-származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
15 HU 201 678 B 16 ii) In vitro AIDV-ellenes aktivitás A 3’-azido-3’-dezoxitimidint teszteltük és számos in vitro vizsgálati rendszerben aktívnak találtuk. Gyógyhatást a reverz transzkriptáz (RT) aktivitás vizsgálatával mértük fertőzött, nem fertőzött és gyógyszerrel kezelt sejtek oldatában. A 3’-azido-3’-dezoxitimidin a H9 és U937 humán limfoblasztoid sejtvonal AIDV fertőzését hatásosan blokkolja 2,7-0,0013 pcg/ml közötti koncentrációban. Hasonlóan, fehérvérsejttel és tenyésztett perifériás vér-limfocilával stimulált normál PHA fertőzést 0,013 pcg/ml alatti gyógyszerkoncentrációban gátolja. Gyógyszer hozzáadásával és anélkül végzett kísérletben a H9 sejt megmutatja, hogy a 3’-azido-3’-dezoxitimidin leghatásosabb akkor, ha az az érzékeny sejt vírusfertőzésének idejében már jelen van, azonban a vírusellenes aktivitás nagyobb része még mindig megmarad, ha az AIDV fertőzés kezdetét követő 20 óra után adagoljuk. A vírus ismétlődésének gátlása szintén nyilvánvaló volt, ha a gyógyszer csak a vírusabszorpció 20. órája körül volt jelen a sejtben. A hatás 0,13 és 0,013 pcg/ml mennyiségnél megmutatkozott. A 3’-azido-3’-dczoxitimidin a tisztított AIDV vírussal szemben anti-RT aktivitást közvetlenül nem fejt ki. Hasonlóan, krónikusan fertőzött H9 AIDV sejtvonalban a vírus termelésére és felszabadulására a gyógyszer egyáltalán nem, vagy csak gyenge hatással rendelkezik. iii) Az AIDV fertőzés meggállása A 3’-azido-3’-dezoxitimidin blokkoló képességét a sejtek AIDV-fertőzésére a következő módon határozzuk meg: Klónozott T4 pozitív tetanusz-specifikus T-segítő limfocitákat izolált AIDV vírussal fertőztük [max. 5000 vírus/sejt mennyiségű dózissal kiváltva] és fertőzés után a sejt túlélését ellenőriztük. A tenyészetben 10 nap után a 8,8 és 1,3 pg/ml 3’-azido-3’-dezoxitimidinnel kezelt fertőzött T-sejteken vírusos citopatikus hatás nem volt látható, míg a nem kezelt fertőzött sejtek ötszörös csökkenést mutattak. A sejt-túlélést az előbbi sejtekből származó, HTLV-I transzformált, AIDV-vel erősen fertőzött scjtvonalban szinten értékeltük. A 3’-azido-3’-dezoxitimidin 2,7,0,27 és 0,13 pg/ml koncentrációban a citopatikus hatást a 7. napra teljesen blokkolja. Sejtmentes vírussal és sejttel társult vírussal előidézett fertőzésben egyaránt védőhatás volt látható. A 3’-azido-3’-dezoxitimidin 0,27 pg/ml koncentrációban a kevésbé rokon Haiti-izolált AIDV-vel előidézett citopatikus hatást szintén hatásosan gátolja. 16. példa Toxicitási vizsgálat A 3’-azido-3’-dczoxitimidin mind egereknek, mind patkányoknak adagoltuk. Mindkét fajnál az LD*, érték 750 mg/kg feled volt. 17. példa HIV - (Human Immunodeftency Virus) elleni aktivitás 3’-Azido-3’-dezoxitimidin-5’-acetát HIV-elleni aktivitását vizsgálva megállapítottuk, hogy az ICj0 érték (az a koncentráció, amely a vírusok 50%-át elpusztítja) 3 pmól. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás hatóanyagként 3’-azido-3’-dezoxitimidin gyógyászatilag elfogadható bázisos sóját vagy 5’-észterszármazékát, úgymint tirfoszfátját vagy acetátját tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az ismert eljárások szerint előállított hatóanyagot ismert, gyógyászatiig elfogadható folyékony vagy szilárd hordozóanyaggal és/vagy egyéb segédanyaggal összekeverjük és adagolásra alkalmas, adott esetben lassú felszabadulású, humán retrovirus által kiváltott betegségek kezelésére alkalmas gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy folyékony hordozóanyagként víztől eltérő oldószert alkalmazunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy steril alkotórészeket alkalmazunk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt injekció formájában állítjuk elő. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt zárt fiola formájában állítjuk elő. 6. A 3. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy folyékony hordozóanyagként steril vizet alkalmazunk. 7. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt orális adagolásra alkalmas készítménnyé alakítjuk. 8. Az 1., 2. vagy 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt tabletta vagy kapszula formájában formázzuk. 9. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt lassú felszabadulású formában, előnyösen hidroxi-metil-ccllulóz bevonattal állítjuk elő. 10. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy adalékanyagként ízesítőszert is alkalmazunk. 11. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményben az aktív hatóanyagot dózisegység vagy ennek többszöröse formájában alkalmazzuk. 12. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az aktív hatóanyagot 5 mg és 1500 mg közötti mennyiségben alkalmazzuk. 13. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az aktív hatóanyagot 10 mg és 1000 mg közötti mennyiségben alkalmazzuk. 14. A10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az aktív alkotórészt 20 mg és 700 mg közötti mennyiségben alkalmazzuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 9
