201657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rovarirtó hatóanyag előállítására Bacillus thuringiensis var. kurstaki fermentálásával
9 HU 201 657 B 10 MnS04 0,02 g CaCOs 3,0 g Szójaliszt (extrahált, pörkölt) 30,0 g Kukoricaliszt 25,0 g Csapvíz 1000 ml A növényi komponensek polihidroxi vcgyületeit hőtűrő alfaamilázzal folyósítjuk (120 KNU/g aktivitású készítményből 0,1 ml/1000 ml táptalaj) 95 ”C, 30 percig. pH: 7,0 Dozirozás: 50 ml/300 ml Erlenmayer-lombik Sterilezés: 1 at 30 perc Inkubációs hőmérséklet: 30 °C Fordulat: 300 n/pcrc 96 órás fermentáció után az 5,5 tömeg% szárazanyag tartalmú szuboptimális aerációjú rázott tenyészetben is mérhető aktivitás: ALG,0 (Pieris) = 1,0 térf.%/24 ó. exp. 3. példa Az 1. példa szerint rázott, szubmerz tenyésztéssel spórás inokulumot állítunk elő a B. thuringicnsis var. kurstaki K-CS 0019 törzs jólspórázó toxinkrislályt termelő szelektált szubkultúrájából. A sterilen összefejtett inokulum 80 ml-évcl oltjuk a BIOTEC-FL110 ü'p. 10 literes laboratóriumi fermentorba előkészített sterilczett, táptalajt, melynek összetétele: Szervetlen sóalap: 1. példa szerint Napraforgódara, extrahált 20,0 g Búzaörlemény 30,0 g Élesztőhidrolizátum 5,0 g Csapvíz 1000 ml Enzimkezelés: a 2. példában ismertetett eljárás szerint. Töltet: 8000 ml pH: 7,0-7,2 Sterilezés: 30 perc, 0,981.104 5Pa Habzásgátláshoz cctil-alkoholt használtunk sterilen, szükség szerinti adagolással. Levegőztetés: 8 liter/perc Keverés: lapátkeverő/400n/perc Hőmérséklet: 30 ‘C, ± 1 *C pH szabályozás: 10 tömeg%-os, HC1, illetve NaOH (steril) adagolásával A 96 óráig vezetett fermentáció biológiai tesztjének eredménye: ALCW (Pieris) = 1,0 térf.% (24 ó. exp.) nativ fcrmcntléből. Liofilczelt: standard fermentlé: ALCJ0 (Pieris) = 1,5 ppm/24 ó. exp.) 4. példa A B. thuringiensis var. kurstaki K-CS 0019 törzsből az 1. példa szerint rázott, szubmerz tenyésztéssel spórás inokulumot állítunk elő. A sterilen összefejtett inokulum 80 ml-ével oltjuk a BIOTECH-FL110 tip. 10 literes laboratóriumi fermentorba előkészített steril táptalajt, melynek összetétele: Szervetlen sóalap: az 1. példa szerint Búzacsíra (GTHSZ 18—8) 5,0 g Élesztőkivonat (DIFCO) 2,0 g Pepton (Witte) 2,0 g Glükóz 15,0 g Csapvíz 1000 ml pH: 7,2 Töltet: 8000 ml Sterilezés: a 3. példánál ismertetettek szerint, azzal az eltéréssel, hogy a glükózt kis hőlchctetlenségű autoklávban külön stcrilezziik 500 ml desztillált vízben oldva és lehűlés után sterilen adagoljuk a töltethez. Az oltás és a fermentáció egyéb paraméterei azonosak a 3. példában leírtakkal. A 96 órás tenyészet biológiai tesztjének eredménye: ALCjo (Pieris) = 4,31 térf.% (24 ó. exp.) nativ fermentléből. Liofilizált standard: ALC*, (Pieris) = 1,596 ppm (24 ó. exp.) SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás rovarokra, különösen lombrágó hernyókra szelektíven letális hatású baktérium endoloxint tartalmazó fermentációs termék előállítására, azzal jellemezve, hogy a NCAIM B 001023 letéti számú Bacillus thuringiensis var. kurstaki K-CS 0019 törzsből szcleku'v festéssel és morfometriai elemzéssel szelektáljuk a jól spórázó és intenzíven delta-endotoxint termelő vonalat, ebből szénforrásként célszerűen 0,1-6,0 tömeg/lérf.% vízoldhaló szénhidrát szénforrást, továbbá szerves nitrogénforrást, szerves bioszanyag forrást, valamint szervetlen sókat tartalmazó tápközegben aerob, szubmerz tenyésztéssel inokulumot készítünk, a kapott inokulumot célszerűen 0,5-8,0 lömcg/térf.% mennyiségű vízoldható szénhidrátot, továbbá szerves nitrogénforrást, szerves bioszanyagforrást, valamint szervetlen sókat tartalmazó tápközegre oltjuk és aerob, szubmerz körülmények között tenyésztjük 8-96 órán át, és a kapott fermenüevel ismert módon bcsűsírjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vízoldható szénforrásként, szénhidrátot vagy szénhidráttartalmú mellékterméket használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szerves nitrogénforrásként növényi és/vagy állati eredetű fehérjét, vagy ezeket tartalmazó melléktermékeket használunk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szerves bioszanyagforrásként élcsztőkivonatot és/vagy biomassza kivonatot használunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
