201560. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-dezoxi-nojirimicin- és 1-dezoxi-manno-nojirimicin-N-szubsztituált származékainak, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

HU 201560 B

2

2.4- difluor-anilin,

3.4- difluor-anilin,

2,4,6-tribróm-anilin,

2-izopropil-anilin,

4-izopropil-anilin,

4-(terc-butil)-anilin,

4-ciklohexil-anilin,

2,3-dihidroindol,

1.2.3.4- tetrahidroizokinolin, tio-morfolin,

2,2-dimetil-l -propil-amino,

2-etil-butil-amin, ciklopentil-amin, cikloheptil-amin,

1-fenil-piperazin,

1 -(2-metil-fenil)-piperazin, l-(3-metil-fenil)-piperazin,

1 -(4-metil-fenil)-piperazin,

l-(2-etil-fenil)-piperazin,

l-(2-klór-fenil)-piperazin,

l-(3-klór-fenil)-piperazin,

l-(2-fluor-fenil)-piperazin,

1 -(4-fluor-fenil)-piperazin, l-(2-ciano-fenil)-piperazin,

1 -(2-nitro-fenil)-piperazin,

1 -(4-nitro-fenil)-piperazin,

l-(2-metoxi-fenil)-piperazin,

l-(3-metoxi-fenil)-piperazin,

1 -(4-metoxi-fenil)-piperazin, l-(2-etoxi-fenil)-piperazin, l-(2-metil-merkapto-fenil)-piperazin, l-(2-hidroxi-fenil)-piperazin,

1 -(4-hidroxi-fenil)-piperazin,

l-(4-trifluor-metil-fenil)-piperazin,

l-(3-trifluor-metil-fenil)-piperazin,

l-(3-trifluor-metil-4-klór-fenil)-piperazin,

l-(2,3-dimetil-fenil)-piperazin,

l-(2,6-dimetil-fenil)-piperazin,

1 -(3,4-dimetil-fenil)-piperazin, l-(3,5-diklór-fenil)-piperazin, l-(3,4-metilén-dioxi-fenil)-piperazin, l-(2,4-dimetoxi-fenil)-piperazin,

1 -(3,4-dimetoxi-fenil)-piperazin,

l-(3,5-dimetoxi-fenil)-piperazin,

l-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-piperazin,

l-(2-piridil)-piperazin,

l-(4-piridil)-piperazin,

l-(2-pirimidil)-piperazin,

1-benzil-piperazin,

1-cinnamil-piperazin,

1 -ciklopropil-piperazin,

1 -ciklobutil-piperazin, 1-ciklopentil-piperazin,

1- (2-ciklohexil-etil)-piperazin, piperazino-ecetsav-morfolid, piperazino-exetsav-pirrolidid, 4-fluor-benzil-amin,

2- klór-benzil-amin,

3- klór-benzil-amin,

4- bróm-benzil-amin,

2-metil-benzil-amin,

4-(t-butil)-benzil-amin,

2- metoxi-benzil-amin,

3- metoxi-benzil-amin,

4- metoxi-benziI-amin,

3.4- metilén-dioxi-benzil-amin,

3.4- dimetoxi-benzil-amin,

3.4.5- trimetoxi-benzil-amin, 4-trifluor-metil-benzil-amin,

3.5- dimetil-benzil-amin,

D(+)-l-fenil-etil-amin,

L(-)-1 -fenil-etil-amin,

2-amino-metil-piridin,

2-amino-metil-tiofén,

4-(2-hidroxi-etoxi)-anilin,

3.4- bisz(trifluor-metil)-anilin,

3.5- bisz(trifluor-metil)-anilin,

4-metoxi-anilin,

2.6- diklór-4-izobutoxi-karbonil-anilin, 4-izobutoxi-karbonil-anilin, 4-(5-metil-hexil-oxi)-anilin,

4-(piridil-metoxi)-anilin vagy 4-etoxi-anilin.

Kísérleteink során azt találtunk, hogy a találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletnek megfelelő vegyületek különösen jó hatással rendelkeznek különböző vírusok, mégpedig DNS- valamint RNS-vírusokkal szemben. A DNS-vírusokhoz tartoznak például a piconda-, papova-, adeno-, herpes-, hepatitis- és himlő-vírusok. Az RNS-vírusok közé tartoznak például a picoma-, reo-, toga-, corona-, otomyxo- és rabdo-vírusok. Különösen hatásosak a találmány szerinti eljárással nyert vegyületek az RNS- vírusok közé tartozó retrovírusokkal szemben. Ezt a következőkben a sejtkultúrákban visna-vírusokkal végzett kísérletekkel igazoljuk. A visna-vírus és HIV- vírus egyaránt a lenti-vírusok retrovírus-alcsaládjába tartozik [Haase A. T. Nature (1986) 322, 130-136]. Mindkét vírus azonos genom- szervezetet és más retrovírusokkal szemben komplex transzkripciót mutat [Sonijo R et al., Cell (1985), 42, 369-382; Davis J. L. et al., Journal of Viroligy (1987) 61 (5) 1325-1331], A visna-vírusokkal megferőzött sejtkultúrák 5-10 nappal a fertőzést követően kifejezett vírus-indukált, citopatikus károsodást mutatnak. Ha az így fertőzött sejtkultúrákat a találmány szerinti eljárással előállított vegyületekkel kezeljük, a citopatikus károsodást meggátolhatjuk.

A visna-vírus-vizsgálatokat 0. Narayan és munkatársai módszere szerint végeztük [Journal of Infectious Diseases 135, 5, 1977, 800-806]. A vizsgálatokhoz a találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket 96 lyukú mikrotiter-lemezekben tenyészközeggel hígítottuk, majd mindegyik lyukba birka fibroblaszt-sejtet adagoltuk 5xl04 sejt mennyiségben, a megfelelő tenyész-közeggel elkeverve. Az egyes lyukak ekkor 50 pl visna-vírusoldatot tartalmaztak, amelynek a there 2,5xl04 TCID50 (TCID - szöveti kultúrát fertőző dózis). Egy vírus dózis megfelel körülbelül 0,05 MOI értéknek (fertőzéshez szükséges mennyiség többszöröse).

A fenti körülmények között, hatóanyag adagolása nélkül 5-10 nap alatt vírus-indukált citopatikus hatás lépett fel. A megfertőzött és kezelt cellákat, valamint a kontroli-sejteket 7 napon át 37 ”C hőmérsékleten 5 % CO2 jelenlétében inkubáltuk.

A kezeletlen vírus-kontrollok esetében a fellépett vírus-indukált citopatikus károsodást a kultúrákban formaiinnal rögzítettük, majd Giemsa-oldattal megfestettük. A gátló koncentráció (IC50) értékét mik-5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

5