201549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás katarantusz drog összes alkaloid-tartalmának kinyerésére savas kezeléssel
1 HU 201549 A 2 gezzük, amelyben a sav pK értéke 2,1-értéket nem haladja meg, igen közel kerültünk a kívánt célhoz. Felismertük azt, hogy bizonyos erős savak (melyek pK értéke 1 és 2 között van) rendkívül károsan hatnak az alkaloidokra, ugyanakkor a gyengébb savaknak kifejezetten védő jellegű hatását lehet tapasztalni. Megállapítottuk azt is, hogy az alkaloid-molekulák bomlását úgy lehet majdnem teljesen visszaszorítani, ha az egész eljárás alatt - folyadékfázisban - savas hatás alatt maradna. így szükségszerű, hogy - saját bázicitásukat is figyelembe véve - vizes közegben ne kerüljenek bázikus körülmények közé. Ezen kritériumok teljesítése esetén a drogban lévő összes alkaloidot jó hatásfokkal kivonatolhatjuk, az alkaloidok feldolgozás során történő bomlása minimális. Meglepő módon a fenti közeg a nem-alkaloid-jellegű ballasztanyagokat csak kis mértékben oldja, így azok könnyen eltávolíthatók. A fentiek alapján a találmány tehát eljárás katarantusz (Catarantus roseus L. G. Donn) drog összes alkaloid-tartalmának kinyerésére a szárított, őrölt drog savas kivonatolása, tisztítása, a kapott extraktlé bepárlása útján, olyan módon, hogy az őrölt drogot pK>2,l -értékű sav 0,5-10 tömeg %-os vizes oldatával 15 "C és 40 °C közötti hőmérsékleten kivonatoljuk, a tisztítást savas pH-értéken, előnyösen pH-2-5 közötti értéken halogénezett szénhidrogénes extrahálással 0,5-1,5 tf % végezzük, majd a bepárlást szárító-szerrel való szárítás után 0,1-1,5 tf % 1-3 szénatomos alkanol és 0,01-0,05 tf % pK>2,l-értékű sav jelenlétében hajtjuk végre. A találmány egy előnyös változata szerint pK>2,lértékű savként borkősavat, ecetsavat vagy foszforsavat, halogénezett szénhidrogénként kloroformot, 1-3 szénatomos alkanolként pedig metanolt vagy etanolt használunk. A találmányunk szerinti eljárást 15 °C és 40 'C között, előnyösen szobahőmérsékleten végezzük, az őrölt drogot több részletben, esetenként 5-10-szeres súlyú 0,5-10 tömeg %-os, 2,1 -nél magasabb pK értékű savat tartalmazó, vízzel kivonatoljuk. Az alkaloidok híg savas-vizes oldatát 2 és 4 közötti pH-értéken halogénezett szénhidrogénnel, előnyösen kloroformmal többször extraháljuk, az egyesített szerves fázist szárítjuk, a szárítószert kiszűrjük, az oldatot pK=2,l-nél nem erősebb savval és alkohollal kezeljük. Alkoholos kezelés esetén az oldatot kloroformmentesítjük, az alkoholt benzolra cseréljük, majd szárazra pároljuk. Savas alkoholos kezelés esetén az oldatot kloroformmentesítjük, az alkoholos savas összkivonat további feldolgozásra kerül. A találmány szerinti eljárás előnye az, hogy a többféle származási helyen drogból ipari méretben, gazdaságosan, vizes extrakcióval végezhetjük el az összes alkaloidok egyidejű kinyerését. A korábban ismert extrakciós eljárásokhoz képest kevesebb szerves oldószert használunk így eljárásunk technológiai szempontból is előnyösebb az ismert egyéb eljárásoknál. Az eljárás során kapott összes alkaloid-tartalmú oldatban, illetve nyerstermékben a kiemelten fontos, alkaloidok megtalálhatók, az analizált tartalom 90 %-át meghaladó mennyiségben, tehát igen jó hatásfokkal. Az eljárással kapott terméket kísérő ballasztanyagok mennyisége csekély, azok nem haladják meg az 1 gramm/kg drog szintet. A találmány szerinti eljárás részleteit az alábbi példával szemléltetjük, anélkül, hogy a találmányt erre korlátoznánk. 7. példa a) ex frakció Katarantusz drogból (melynek vinblasztin-tartalma: 380 mg/kg, katarantin-tartalma: 500 mg/kg, vindolin-tartalma: 1200 mg/kg) 1-1 kg őrleményt szobahőmérsékleten háromszor 3 órán át 7-7 liter 1 % borkősavat tartalmazó vízzel extrahálunk ellenáramban szakaszosan, a feldolgozást az egyensúlyi extraktléből végezzük. Az egyensúlyi extraktlé 7 literét (amely megfelel 1 kg drognak) egyszer két liter, majd négyszer 1 liter kloroformmal extraháljuk. Az egyesített kloroformos kivonatokat vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, a szárítószert kiszűrjük. A szárított kloroformos kivonat feldolgozását az alábbi módokon végezhetjük: b) feldolgozás: I. Az oldathoz 50 ml etanolt és 1,5 ml ecetsavat adunk, majd 40 °C-os fürdőről csökkentett nyomáson kloroformmentesre pároljuk. A maradék oldatot etanollal 50 ml-re egészítjük ki. A kapott etanolos oldat vinblasztin-tartalma 370 mg (97 %), katarantin- tartalma 480 mg (96 %), vindolin-tartalma 1150 mg (96 %). II. Az oldathoz 50 ml etanolt adunk, majd 40 °C-os fürdőről csökkentett nyomáson kloroformmentesre pároljuk. A maradék etenolos oldathoz 30 ml benzolt adunk, majd csökkentett nyomáson, 40 °C-on szárazra pároljuk. 8,2 g barna, porszerű száraz- maradékot kapunk. [Vinblasztin-tartalom: 350 mg (92 %), katarantin-tartalom: 465 mg (93 %), vindolintartalom: 1140 mg (95 %)]. c) analitika: mind a kiindulási termék, mind a kapott termék analitikai vizsgálatát HPLC-módszerrel végezzük el, majd standardokkal hasonlítjuk össze. Az adatokban szereplő alkaloidok az alább megadott kromatográfiás rendszerben, (mely egyébként megegyezik az Egyesült Államok Gyógyszerkönyvények (USP XXL) Vinblastine Sulfate c. cikkelyének (2453. oldal) a vinblasztin tisztaságát vizsgáló és megkövetelő HPLC-s módszerével) egymástól jól elválaszthatók és referens standard anyagokkal szemben nagy pontossággal mérhetők. Áz eljárás kivitelezését Isco (USA) gyártmányú 2 pumpás HPLC- berendezésen végezzük. Oszloponként Lichrosorb RP-18 5 mikron szemcsézetű töltetet, eluensként pedig A és B oldat 28:72 arányú elegyét használjuk. A oldat: 14 ml dietilamin +986 ml víz elegyét H3P04-el pH-7,5 értékre állítjuk. B oldat: 200 ml acetonitril + 300 ml metanol elegye. A detektor hullámhosszát 262 nm-re állítjuk be. A terméket eluensben oldva közvetlenül injektáljuk a készülékbe. A kapott eredményekből a bemérés és hígítások figyelembe vételével számítható ki a kiindulási anyag és kapott tennék egyes komponenseinek mennyisége. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
