201515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,6-difluor-benzamid előállítására mikrobiális hidrolizissel, valamint eljárás az eljárásban alkalmazható mikroorganizmus tenyészet előállítására
I HU 201515 B 5 percig 25 cm távolságról 60 wattos wolframlámpával besugározzuk, utána 75 g 2,6-difluor-benzonitrilt adunk hozzá, és az elegyet 16 órán át besugárzás közben 25 °C-on tartjuk. Ebben az időpontban a gázkromatográfiás elemzés szerint a nitril 98,9-os konverzióval 2,6-difluor-benzamiddá alakult; amely az oldatból a képződése során kikristályosodik. A kristályos csapadékot közvetlenül kinyerjük, és etil-acetátból átkristályosítva 50,3 g 2,6-difluor-benzamidot kapunk. A reakcióelegy további hűtésével és bepárlásával még 16 g 2.6-difluor-benzamidot izolálhatunk. A kapott termék IR-spektruma azonos az 5. példában előállított termékével. 3. példa 50 pl Rhodococcus Sp. NCIB 12218 foszfát-pufferoldatos sejtszuszpenziót állítunk elő, és a 2. példában leírt módon besugározzuk, majd 5 pl 2,6- difluor-benzonitril 1 ml n-heptánnal készült oldatát adjuk hozzá. A besugárzást és keverést szobahőmérsékleten folytatjuk. Az oldatból kristályok válnak ki; 14 óra elmúltával további 10 pl 2,6-difluor-benzonitrilt adunk hozzá, és 18 óra elmúltával a kristályokat kiszűrjük. Az elemzés szerint a 2,6-difluor-benzonitril lényegében teljes mértékben 2,6-difluor-benzamiddá alakult át. A kapott termék IR-spektruma azonos az 5. példában előállított termékével. 4. példa Az 1. és 2. példában leírt módon foszfát-pufferoldatban Rhodococcus Sp. NCIB 12218 sejtekből szuszpenziót készítünk. 3,2 ml szuszpenziót mágneses keverővei keverve, üvegedényben, 25 °C hőmérsékleten a 2. példában leírt módon 5 percig besugárzunk, és utána 50 ml térfogatig n-heptánt adunk hozzá. A besugárzást és keverést 28 °C-on folytatjuk, és 3,24 g 2.6-difluor-benzonitrilt adunk hozzá. Az 5 óra múlva végzett gázkromatográfiás elemzés szerint a nitril 92 %-ban amiddá alakult. A kapott tennék IR-spektruma azonos az 5. példában előállított termékével. 5. példa A; 1. és 2. példában ismertetett módon Rhodococcus Sp. NCIB 12218 foszfát-pufferoldatos (pH=8,0) sejtszuszpenziót állítunk elő. 5 ml szuszpenzióhoz 0,1 ml 2,6-difluor-benzonitrilt adunk, majd a kapott elegyet 25 °C hőmérsékleten 62 percen át inkubáljuk. Az oldatból kivált kristályokat elkülönítjük és etil-acetátban felodjuk, majd az oldatot magnézium-szulfáton vízmentesítjük. Az oldószert desztillációval eltávolítjuk. A terméket kristályos anyag formájában kapjuk, a kiindulási nitril vegyületre vonatkoztatva 99,5 %-os konverzióval. A termék azonosítását infravörös spektroszkópiás analízissel végezzük. A csatolt ábrákon bemutatjuk a kapott termék 1. ábra, valamint a 2,6-difluor-benzonitril (DFNB) 2. ábra, a 2,6-difluor-benzoesav (DFBA) 3. ábra, és a 2,6-difluor-benzamid (DFBAM) 4. ábra hiteles mintáinak infravörös spektrumát. A spektrumok összevetése alapján megállapítható, hogy a kapott kristályos termék 2,6-difluor-benzamid. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás 2,6-difluor-benzamid előállítására, azzal jellemezve, hogy 0-37 °C hőmérsékleten, 6-9 pH-értéken 2,6-difluor-benzonitrilt Rhodococcus Sp. NCIB 12218 mikroorganizmus törzshöz tartozó mikroorganizmussal vagy annak mutánsaival vagy variánsaival kezelünk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy mikroorganizmusként Rhodococcus Sp. NCIB 12218 mikroorganizmust alkalmazunk. 3. Eljárás Rhodococcus Sp. NCIB 12218 mikroorganizmus tenyészet előállítására, azzal jellemezve. hogy a tárgyi körben megadott mikroorganizmust megfelelő táptalajon tenyésztünk. 5 10 15 20 25 30 35 4
