201477. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sertések torzító orrgyulladása ellen alkalmazható, élő Bordetella bronchiseptica vakcina előállítására
HU 201477 B 3 cina orrnyálkahártyán való alkalmazásakor jelentkező kedvező hatás lényegében két fontos tényező következménye: 1. Immunizálás hatására a malacok nyálkahártyájában olyan fokú lokális védelem jön létre, amely 5 2-3 hónapig eliminálja a virulens Bordetella bronchiseptica törzseket az orrnyálkahártyájáról. Ez pedig előnyösen befolyásolja az állatok virulens Pasteurella múltoddá törzsekkel történő fertőződését. Egyrészt, mert az utóbbiak az egészséges 10 orrnyálkahártyában nem tudnak megtelepedni, másrészt, mert a Bordetellák és Pasteurellák szomatikus antigénjei rokonságban vannak egymással. 2. A Bordetella bronghiseptica törzsekkel való immunizálás hatására olyan ellenanyagok is megje- 15 lennek, amelyek a Pasteurella múltoddá törzsekkel keresztreakciót mutatnak. Ezeknek az ellenanyagoknak szerepük van a Pasteurella múltoddá elleni védelemben is. A következő példákkal közelebbről kívánjuk be- 20 mutatni találmányunkat, a korlátozás szándéka nélkül. Az 1. példában felhasznált táptalaj minden komponense beszerezhető a REANAL Finomvegyszergyárban. 25 1. példa A vakcina előállítása N-104-es liofilezelt Bordetella bronchiseptica törzsből történt (deponálási szám: NCAIM B (P) 0010204). A liofilezett törzset felbontás után 24 órán át 37 °C-on Westphal-aga- 30 ron szaporítottuk (100 ml-enként 5 g húskivonat /Láb. Lemco powder, Oxoid L 29/), 15 g Tripton (Oxoid L 42), 5 g élesztőkivonat (Yeast extract, Oxoid L 21), 10 g agar-agar (Oxoid L 28), 2,1 g dinátrium-hidrogén-foszfát (NasHPO.» . 12 Hí), 35 majd III. fázisú savóval ellenőriztük, hogy a III. fázishoz tartozik-e. A Westphal-agarról a lemosott tenyészetet olyan, 7,4 pH-jú folyékony tápközegbe oltottuk, amely 1000 ml-enként 5 g húskivonatot (Láb. Lemco powder, Oxoid L 29), 15 g Triptont 40 (fehérje készítmény, Oxoid L 42), 5 g élesztőkivonatot (Yeast extract, Oxoid L21), 1 g glukózt, 3 g konyhasót, 2,3 g dinátrium-hidrogén-foszfátot (NazHPOa . 12 H2) tartalmazott. A levesben a 4 tenyésztést addig folytattuk, amíg a csíraszám - kolorimetrikusan mérve - a 2xl010/ml értéket el nem érte. Ezt követően az anyagot azonnal liofileztük. A liofilezést 1 milliliteres tenyészadagokkal végeztük, ez a mennyiség 10 malac vakcinaadag)át tartalmazta. Felhasználáskor a liofilezett, 10 adagos ampulla tartalmát 10 milliliter foszfát-pufferben közvetlenül az alkalmazása előtt feloldottuk, majd összerázás után adtuk be az állatoknak. Malacoknak születésük után 6 órán belül kell a feloldott vakcinából orrnyílásonként 0,5 millilitert befecskendezni tűnélküli fecskendővel mindkét orrnyílásba úgy, hogy a vakcina az orrüreget átjárja. A maradék vakcinát hővel meg kell semmisíteni. A vakcina emberre teljesen ártalmatlan. A leírt vakcina hatékonyságát üzemi modellkísérletekben 50 ezer sertésen ellenőriztük. Ennek során malacokban több immunizálási sémát próbáltunk ki (I.-IV.: egyedül az avirulens, élő törzzsel orrba, V.: elölt Bopavac vakcinával bőr alá: VI.: elölt Bopavac vakcinával bőr alá és az élő törzzsel orrba): I. A születést követő 6 órán belül II. Születéskor és 30 napos korban III. Születéskor és 30 napos korban IV: Születéskor és 60 napos korban V. 15 és 30 napos korban a 186 941 lajstromszámú magyar szabadalom szerint elölt (Bopavac) vakcinával VI. 15 és 30 napos korban elölt (Bopavac) vakcinával és 30 napos korban élő törzzsel. 1. kísérlet Négy nagyüzem (a, B, C, D) torzító orrgyulladásban megbetegedett sertései között végeztünk az I.-IV. séma szerinti vakcinázásokat. Az 1. táblázat minden adata 20 vakcinázott, illetve kontroll sertés orrában talált és keresztekben kifejezett kórbonctani elváltozásokat szemlélteti átlagban. A legenyhébb elváltozás +, a legsúlyosabb + + + +. Az átlagok kiszámításának módja: pl. 15 meg., 4 + , 1 + +, keresztek összege 6, osztva 20-al = 0,30 kereszt. 1. táblázat Állomány I. Vakcinázási sémák II. III. Az orrleletek átlaga keresztben megadva IV. Kezeletlen kontroll A — 0,85 0,45 _ 2,20 B ~-0,55 0,60 2,15 C-0,65 0,45 0,75 2,00 D 0,85--1,9 2. kísérlet Torzító orrgyulladásban megbetegedett nagyüzemi sertésállományokban végeztünk immunizálási kísérleteket 5000 sertéssel a III., V. és VI. séma szerint. A 2. táblázat minden adata 20 immunizált és kontroli-sertés orrában talált elváltozásokat mu-3
