201476. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szervek és szervrészek összenövésének megakadályozására alkalmas készítmények előállítására
HU 201476 B tunk sókat, például nátrium-kloridot, de pufferanyagokat, úgymint dikálium-hidrogén-foszfátot vagy nátrium-dihidrogén-foszfátot is. Az előnyösen liofilizált t-PA-t vagy rt-PA-t feloldjuk a sterilezett hidrogélben; ezt a felhasználásra kész hidrogélt néhány napig tárolhatjuk is alacsonyabb hőmérsékleten. Hosszabb ideig azonban előnyös a sterilizált hidrogélt és a liofilizált t-PA-t vagy rt-PA-t külön tárolni, és a kész oldatot csak röviddel felhasználása előtt elkészíteni ennek a két összetevőnek az összekeverésével. A vizsgálatok kimutatták, hogy a hidroxi-etil-cellulóz hidrogélnek magának is van összenövést gáltó hatása; azokkal az esetekkel összehasonlítva, amikor ilyesfajta profilaxist nem alkalamaztunk, 40%ig terjedő hatást fejt ki. A hidroxi-etil-cellulóz hidrogél profilaktikus aktivitása a t-PA jelenléte következtében növekszik. A találmány szerinti hidrogél készítmény csökkentett viszkozitásnál könnyen - például egy endoszkópra szerelt csővel - be is csöpögtethető a veszélyeztetett helyekre, például a testüregekbe. A találmány szerinti hidrogél 1-3 g, 07-99 g vízben vagy fiziológiás konyhasóoldatban oldott hidroxi-etil-cellulózból áll, és 0,05-50 mg/ml, előnyösen azonban 03-10 mg/ml t-PA-t vagy rt-PA-t tartalmaz, bázikus aminosavakkal, például lizinnel vagy argininnel együtt vagy anélkül. A cellulóz vízoldható hidroxi-etil-étere előnyösen egy olyan éter, amelynek átlagos molekuláris szubsztitűciós foka 1,5-3,0 hidroxi-etil-csoport/anhidroglükóz egység. Egy előnyös hidrogél 2 tömeg% hidroxi-etil-cellulózból (például Natrosol 250 HX védjegyzett nevű termék) áll vízben, fiziológiás konyhasó- vagy pufferoldatban oldva, és 2 mg/ml t-PA-t vagy rt-PA-t tartalmaz. 1 mg = ml rt-PA és 2 tömeg% hidroxi-etil-cellulóz fiziológiás konyhasóoldattal készített keverékét nyulakon vizsgáltuk 2 tömeg% hidroxi-etil-cellulóz fiziológiás konyhasóoldattal készített keverékét és kontrollal (csak fiziológiás konyhasó-, illetve pufferoldat) összehasonlítva. Ehhez összenövéseket hoztunk létre a) a hasfalban varratot képezve a hasfal metszése (laparotomia) után, vagy b) a zeokum, a csípőbél és a kismedence területén jódoldattal izgatva a peritoneális szövetet. Az a) esetben a vizsgálandó anyagot felvittük és a hasfal metszése utáni varratot többszörösen lezártuk. A műtétet végző, illetve a vizsgálatot végrehajtó személy nem tudta a vizsgált anyag összetételét. Egy hét után egy a bőrön ejtett nagy vágással átmetszettük és feltártuk a régi hasfalmetszési varrat területét, megmértük az összenőtt bélszövet hosszát a hasfalmetszési varratnál és az összetapadás hosszúságát a hasfalmetszési varrat hosszának százalékában fejeztük ki. A b) esetben a vizsgálandó anyagot (t-PA-val vagy anélkül) a beavatkozás után azonnal és a hasüreg újbóli bevarrása előtt alkalmaztuk. A műtétet végző ebben az esetben sem tudta a vizsgált anyag összetételét. A beavatkozás után 7 nappal az állatok hasfalát általában újra felmetszettük, hogy meghatározzuk az összenövések mértékét. Ehhez megmértük a ká3 rosodott területen a kezelt béldarabok húzásnak ellenálló összetapadásainak felszínét. Az eredményeket százalékos összetapadásként adjuk' meg a károsodott terület felszínének százalékában. Ezen felül megmértük az állatok testtömegét az első hasfelmetszés és a hasfal újrafelnyitása napján. Ezeknek a kísérleteknek az eredményeit az 1. ábrán mutatjuk be. Az abszcisszán a százalékos összetapadásnak, illetve a testtömeg százalékos változásának mértéke van feltüntetve; 1. a kontroll, 2. a Natrosol (hidroxi-etil-cellulóz) 2 tömeg%os fiziológiás konyhasóoldata, és 3. A Natrosol-ban oldott t-PA (1 mg rt/PA/1 ml 2 tömeg% hodroxi-etil-cellulózt tartalmazó fiziológiás konyhasóoldat) alkalmazása esetében. Az 1. ábra eredményeinek összehasonlítása azt mutatja, hogy az egymagában alkalmazott hidroxietil-cellulóz hidrogél a kontrolihoz viszonyítva középértékben 40-45%-kal csökkentetette a zoekumban és a csípóbélben a kísérleti körülmények által kiváltott összetapadásokat, az rt-PA-val együtt alkalmazva azonban a zoekumban majdnem teljes (95%-os) csökkenést, a csípőbélben körülbelül 85%-os csökkenést eredményezett. A hasfalmetszési varrat (hasfal) összetapadását az alatta elhelyezkedő szövetekkel a hidrogél már egymagában is jelentős mértékben csökkenti; az rt-PA jelenlétében azonban az összetapadás teljesen visszaszorul. A találmány szerinti, t-PA-t és rt-PA-t tartalmazó hidrogél készítmények alkalmazása az első gyógyulási szakaszban fellépő testtömegcsökkenést jelentősen mérsékli. A találmány szerinti készítményformák előállítását a következő nem-korlátozó példákkal szemléltetjük. 1. példa 0. 1.mg/ml rt-PA-t tartalmazó rt-PA készlet 1. Megfelelő edényben 98 g sterilizált fiziológiás konyhasóoldatba 2 g mikrobiológiailag tiszta hidroxi-etil-cellulózt szórunk és szobahőmérsékleten keverve feloldjuk. A képződött gélt lamináris levegőbefüvás közben 50 ml-es bedugaszolható üvegbe töltjük, gumidugóval bedugjuk és peremét is lezárjuk, majd ezután 30 percig 121 °C-on túlhevített vízgőzzel sterilizáljuk. A lezárt gél szobahőmérsékleten 2 évig tárolható. 2.10,20, illetve 30 mg rt-PA-t steril körülmények között bedugaszolható üvegben liofilizálunk, gumidugóval bedugjuk és peremét is lezárjuk. A lezárt üvegcse szobahőmérsékleten (25 °C-ig) 2 évig tárolható. 3. Felhasználásra kész oldat: 50 g steril 2 tömeg%-os hidroxi-etil-cellulóz gélhez lamináris levegőbefúvás közben 5 mg liofilizált rt-PA-t adunk és steril üvegbottal keverve feloldjuk. Ezt a felhasználásra kész gélt vagy azonnal felvisszük a sebvarratra, vagy hűtőszekrényben 4 °C alatti hőmérsékleten néhány napig tárolhatjuk. 2. példa 1,0 mg/ml rt-PA-t tartalmazó rt-PA gél 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
