201355. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kinin, kinidin és dihidro-származékaik mikrobiológiai hidroxilezésére
7 HU 201355 B 8 6. példa Dihidrokinidin hidroxilezése M. plumbeus gomba alkalmazásával Két 100 ml térfogatú M. plumbeus MMP 430 tenyészetet az 1. példában leirt .A" közeg alkalmazásával összekeverünk, centrifugáljuk, a micéliumot steril körülmények között literenként 2 g dikálium-hidrogén-foszfátot és 1 g kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmazó, desztillált vizes pufferoldattal mossuk, majd 100 ml azonos összetételű pufferoldatba helyezzük, és 0,5 g/liter végkoncentrációban vett dihidrokinidinnel inkubáljuk. 27 °C hőmérsékleten végzett 5 napos inkubálás után 6,5 mg hozammal kapunk (3S)-3-hidroxi-dihidrokinidint, és 40 mg dihidrokinidint nyerünk vissza a szokásos módszerekkel. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a (II) általános képletű vegyületek - ahol 5 R jelentése etil- vagy vinilcsoport -előállításéra regiospecifikus és sztereospecifikus 3S-hidroxilezéssel, azzal jellemezve, hogy egy (I) általános képletű kinint, kinidint vagy dihidro-származékukat - ahol az 10 (I) képletben R jelentése a fentiekben meghatározott - Cunninghamella echinulata-, Mucor circinelloides-, Mucor plumbeus- vagy Streptomyces rimosus-tenyészettel hozunk kölcsönhatásba 15 és a keletkezett terméket kinyerjük, azzal a feltétellel, hogy a kinidin hidroxilezéséhez Cunninghamella echinulata-tól eltérő mikroorganizmus-tenyészetet alkalmazunk. 2. Az 1. igénypont szerinti hidroxilezési 20 eljárás, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust asszimilálható szén-, nitrogén- és ásványisó-forrást tartalmazó közegben, aerob fermentációs körülmények között, süllyesztett kultúrában tenyésztjük. 25 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hidroxilezni kivént (I) általános képletű vegyületet közvetlenül adjuk a tenyésztőközeghez, ha a mikroorganizmus szaporodása a kielégítő mérté- 30 két elérte. 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hidroxilezni kívánt (I) általános képletű vegyület inkubálását közvetlenül végezzük előzőleg mosott 35 sejtekkel, amelyeket szén- vagy nitrogénforrást nem tartalmazó közegben reszuszpendálunk. 5. A 2. igénypont szerinti hidroxilezési eljárás, azzal jellemezve, hogy az inkubálást 40 20-30 °C hőmérséklet-tartományban végezzük. 6. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyésztőközeg pH-értékét megközelítőleg 6-8-ra állítjuk. 45 Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest - A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4966 - KJK 91.3462.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató 6
