201351. lajstromszámú szabadalom • Eljárás D-(-)-tejsav előállítására
3 HU 201351 B 4 Ezt ismert módon végezzük, például egy bázis, pl. ammónia, nátrium-, kálium- vagy kalcium-hidroxid (meszes víz) vagy alkálifémvagy alkáliföldfém-karbonát, különösen kalcium-karbonát fokozatos adagolásával. A kalci- 5 um-karbonát számított mennyisége egyszerre is adagolható a fermentáció elején. Ez fokozatosan oldódik, ahogyan a D-(-)-tejsav képződik. Következésképpen a pH a kívánt értéken marad. 10 Felületaktiv anyag, például hosszúszénláncú alkoholok vagy savak és epoxi-etán vagy epoxi-propán addiciós terméke adagolása szintén előnyös. Ilyen anyagok például a Tweenüb és Span<A> védjegyű termékek. 15 A tejsav kinyerését a fermentléból szintén ismert módon végezzük. így, ha a pH szabályozására a fermentáció során egy kalcium-vegyületet, például kalcium-karbonátot használunk, a képződött kalcium-laktát D- 20 -(-)-tejsavvá alakítható úgy, hogy kénsavat adagolunk, a képződő kalcium-szulfátot leszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük a kolátozás szán- 25 déka nélkül. 1. példa 30 I. tápközeget készítünk tejsavó ultraszűrési szűrletéből. Az említett szűrlethez (szárazanyag-tartalma 5 töm/térf%) a következő anyagokat adjuk: 10 térfX lefölözött tej, 35 1 töm/térfX élesztőkivonat, 0,1 térfX Tween-80, foszfát (literenként 1,1 g Na2HP04.2H20 és 1.2 g KH2PO4) 0,002 töm/térfX nátrium-formiát, 40 0,01 töm/térfX nátrium-karbonát, kataláz (2 Keil-egység literenként) A tápközeg lak tóztar talma mintegy 4.3 töm/térfX. A tápközeget pasztőrözzük, lehűtjük a 45 tenyésztés hőmérsékletére (37 °C) a fermentorban, és 1 térfX-os Lactobacillus bulgaricus CBS 743.84 tenyészettel oltjuk be, a pH-t ammónium-hidroxiddal 6,0 értékre állítjuk be. A pH-t a fermentáció során 6,0 értéken tartjuk ammónium-hidroxid automatikus adagolásával, és az elegyet folyamatosan keverjük. A fermentáció során a laktóz átalakítását az ammónia fogyásának mérésével követjük nyomon. Az ammónia fogyásából ki lehetett számítani, hogy ha minden laktóz molekulából négy molekula tejsav képződik, akkor 22 óra alatt a laktóz 89,8X-a alakul át. A képződött tejsav enzimatikus meghatározása azt mutatja, hogy 22 órai fermentálás után az eredetileg jelenlevő laktóznak több mint 85X-a valóban tejsavvá alakul. A képződött tejsavnak több mint 99X-a D-(-)-izomer. 2. példa II. tápközeget centrifugált tejsavóból készitünk, a következő anyagok adagolásával: 10 térfX lefölözött tej, 1 töm/térfX élesztőkivonat, 0,1 térfX Tween-80 foszfát (literenként 1,1 g Na2HP04.2Hz0 és 1,2 g KH2PO4) 0,008 töm/térfX nátrium-formiát, 0,01 töm/térfX nátrium-karbonát, kataláz (literenként 4 Keil-egység). A tápközeg laktóztartalmát laktóz adagolásával 9,26 töm/térfX-ra emeljük. A fenti tápközegen Lactobacillus bulgaricus CBS 743.84 törzset tenyésztünk az 1. példa szerinti módon. Előre meghatározott időpontokban számítjuk a laktóz átalakulását az ammónia fogyásából, és emellett bizonyos időpontokban mérjük a laktóz, galaktóz és tejsav mennyiségét. Az eredményeket az I. táblázat mutatja. A tejsav mennyiségét korrigáltuk a tejsav azon mennyiségével, amely már a teszt kezdetekor jelen volt. Az A oszlop a laktóz átalakulásának százalékát mutatja az ammóniafogyás alapján számítva, a B oszlop a tejsav számított mennyiségét mutatja, amely a laktóznak a galaktóz maradék mennyiségével kiigazított mennyiségéből képződött volna, a C oszlop a valóban képződött tejsavmennyiséget mutatja a B oszlop mennyiségére vonatkoztatva százalékban. I. táblázat Tenyészidő (óra) 37 °C-on Laktóz (g/1) Galaktóz (g/1) Termelt tejsav (g/1) D-(-) L-(+) Összes A (X) B (g/1) C (X) 0 92,6 0,6 0 0 0 0 0 16 1/4 12,4 27,6 53,5 2,2 55,7 60,5 57,4 97 19 1/2 71,5 21 1/2 77,3 24 1/4 4,1 11,6 77,0 3,8 80,8 85,0 82,2 98 40 1/4 0,1 2,6 80,3 5,6 85,9 100,6 95,4 90 48 1/2 100,6 4
