201350. lajstromszámú szabadalom • Eljárás plazmidok stabilizálására
29 HU 201350 B 30 a kanamicin rezisztenciát (Km1) és Par A*, ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, b) pOU71-184 plazmid előállítására pOU71 plazmidot EcoRl enzimmel kezelünk, a pOUl EcoRl-A : : Tn5 fragmensét beiktatjuk, majd ligálás után E. coliba transzformáljuk, és a KmR-t és ParA*, ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, c) pOU2 plazmid előállítására pJL124 plazmidot PstI enzimmel kezelünk, PstI enzimmel részlegesen emésztett pKN184 plazmiddal keverjük, ligáljuk és E. coliba transzformáljuk, és a ParA*, ParB* fenotipuBt közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, d) pOUlO plazmid előállítására a pOUl plazmid EcoRl-A : : Tn5 fragmensét pF1403- -11 plazmid EcoRl helyére iktatjuk be, majd E. coliba transzformáljuk, és a ParA*, ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, e) pOU13 plazmid előállítására EcoRl-A fragmentum P6tl-D fragmentumát pBR322 PstI helyére iktatjuk be, a kapott pOU93 plazmidot Rsal enzimmel kezeljük, az Rsal fragmentumot, amely a parB területet hordozza, a pHP34 plazmid Sraal helyére beiktatjuk, majd E. coliba transzformáljuk, és a ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, f) pOU14 plazmid előállítására pOU13 plazmidot EcoRl enzimmel kezelünk, a pOU13 plazmid EcoRl fragmentumát, amely a parB területet hordozza, pOUlOl plazmid EcoRl helyére iktatjuk be, majd E. coliba transzformáljuk és a ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, g) pOU61 plazmid előállítására pKN184 plazmid EcoRl-A fragmentumát pOU90 plazmidba iktatjuk be, Sall-gyel kezeljük, ligáljuk, és a ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, h) pOU13 plazmid előállításéra pOUl plazmidot Sall-gyel kezelünk, Sall-gyel kezelt pF1403-ll plazmiddal keverjük, ligáljuk, és E. coliba transzformáljuk, és a ParB* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, i) pOU45 plazmid előállítására pMC903 plazmidot EcoRl-gyel kezelünk, pOU43 plazmid EcoRl fragmentumát, amely a parA területet hordozza, iktatjuk be, ligáljuk és E. coliba transzformáljuk, majd a ParA* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, j) pOU47 plazmid előállítására pOU43 EcoRl fragmentumát pOU82 plazmid EcoRl helyére iktatjuk be, E. coliba transzformáljuk és a ParA* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk, k) pOU472 plazmid előállítására pOU47 EcoRl fragmentumát, amely a parA területet hordozza, 400 bp-vel csökkentjük Bal31 exonukleéz segítségével, E. coliba transzformáljuk és a ParA* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk. (Elsőbbsége: 1983. 09. 09.) 11. Eljárás pOU91 stabilizált plazmid előállítására, azzal jellemezve, hogy pOU90 plazmidot BamHI-gyel és részlegesen Sau3A-val hasítjuk, ligáljuk és E. coliba transzformáljuk és a ParA* fenotipust közvetítő plazmidokat kiválasztjuk. (Elsőbbsége: 1982. 09. 24.) 12 Eljárás stabilizált plazmidot befogadó Gram-negativ baktériumok előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Gram-negativ baktérium törzsbe valamely, az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti módon előállított plazmidot transzformálunk. (Elsőbbsége: 1982. 09. 16.) 13. Eljárás stabilizált plazmidot befogadó Gram-negativ baktérium előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Gram-negativ baktérium törzsbe valamely, a 10. igénypont szerinti módon előállított plazmidot transzformálunk. (Elsőbbsége: 1983. 09. 09.) 14. Eljárás stabilizált plazmidot befogadó Gram-negativ baktérium előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely Gram-negativ baktérium törzsbe egy, a 11. igénypont szerinti módon előállított plazmidot transzformálunk. (Elsőbbsége: 1982. 09. 24.) 15. A 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Gram-negativ baktériumként E. coli törzset alkamazunk. (Elsőbbsége: 1982. 09. 16.) 16. Eljárás plazmid DNS géntermékének előállítására, azzal jellemezve, hogy egy az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított plazmidba egy vagy több, a plazmiddal természetes módon nem kapcsolatos gént iktatunk be, az ezt a plazmidot tartalmazó Gram-negativ baktériumot tenyésztjük, és kívánt esetben a génterméket kinyerjük. (Elsőbbsége: 1982. 09. 16.) 17. Eljárás plazmid DNS géntermék előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a 10. igénypont szerinti eljárással előállított plazmidba egy vagy több, a plazmiddal természetes módon nem kapcsolatos gént iktatunk be, az ezt a plazmidot tartalmazó Gram-negativ baktériumot tenyésztjük, és kívánt esetben a génterméket kinyerjük. (Elsőbbsége: 1983. 09. 09.) 18. Eljárás plazmid DNS géntermék előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a 11. igénypont szerinti eljárással előállított plazmidba egy vagy több, a plazmiddal természetes módon nem kapcsolatos gént iktatunk be, az ezt a plazmidot tartalmazó Gram-negativ baktériumot tenyésztjük, és kívánt esetben a génterméket kinyerjük. (Elsőbbsége: 1982. 09. 24.) 19. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést legalább 100 baktériumgeneráción át folytatjuk. (Elsőbbsége: 1982. 09. 16.) 20. Eljárás egy par terület egy plazmidba történő korrekt beiktatásának szelektálására, azzal jellemezve, hogy egy feltételezetten beiktatott par területet hordozó plazmidot olyan baktériumba transzformálunk, amely egy másik, nem-rokon, azonos par te-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
