201333. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliamin kelátok ródium-komplexeinek, valamint ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
17 HU 201333 B 18 16. Példa Cí0SRh(BA-2,3,2-tet)C12]*Ct~ és antitest konjugátum előállítása [-105Rh(BA-2,3,2-tet)Cl2]*Cl- komplexet a szénhidrogén oldalláncon keresztül Murayama és intársai, módszere szerint antitesthez kapcsoltunk [A. Murayama, K. Shimada és T. Yamoto, Immunochemistry, 15, 523-528, (1978)]. Antitestként CC-49 egér monoklón IgG antitestet használtunk, amely a tumorral kapcsolatos antigénhez, az epitope TAG-72-höz kötődik. 1 mg tisztított CC-49 IgG-t (10 mg/ml 0,05 mólos nátrium-acetátban, pH = 5,2) 1 mmólos NaIOí oldattal (0,01 ml 0,1 mólos oldatban) kezeltünk 1 órán át szobahőmérsékleten sötétben. Az ily módon aktivált antitestet ezután elválasztottuk, a feleslegben alkalmazott NaICü oldatból centrifugálásos gélszüréssel kinyertük, majd az aktivált antitesthez 0,1 ml [‘105Rh( BA-2,3,2,-tet)Clz]*Cl' komplexet (körülbelül 5 mCi/ml, 1 x 10'4 mól) és 0,01 ml NaCNBH4 (0,1 mól) oldatot adagoltunk. A kapcsolást 2 órán keresztül szobahőmérsékleten végeztük. A l05Rh jelzett antitestet ezután ismételt centrifugálásos gélszűréssel elválasztottuk, az antitest integritást standard biokémiai és immunológiai eljárásokkal igazoltuk. 17. Példa [-1KRh (BITC-2,3,2,-tet)Ch]> Ct előállítása ['105Rh(BA-2,3,2-tet)Cl]*Cl‘-t a reakcióképes [105Rh(BITC-2,3,2-tet)Cl2]*Cl_ származékká alakítottunk oly módon, hogy 2 ml [-105Rh(BA-2,3,2-tet)Cl2]*Cl--t (körülbelül 5 mCi/ml, 1 x 10~4 mól) 0,002 ml tiofoszgénnel elkevertünk. A reakciót körülbelül 15 percen át szobahőmérsékleten végeztük, majd a terméket Hamilton PRP-1 Chrompak-töltetű oszlopon való átengedéssel elválasztottuk, és a cím szerinti terméket 2 ml acetonitrillel eluáltuk. A kapott termék fizikai adatai azonosak voltak a 14D példa szerint előállított vegyületek adatával. Az eljárásnál 50-85%-os kihozatalt értünk el. *BITC-2,3,2-tet=6-(p-izotiocianátó-benzil)-1,4,8,11-tetraaza-undekán 17a. Példa (~lKRh(BITC-2,3,2-tet)Ck]>Ct' és antitest konjugátum előállítása Az [*105Rh(BITC-2,3,2-tet)Ch]* komplexet tumor specifikus antitestek (IgG) lizin csoportjaihoz kapcsoltunk a következő eljárás szerint. Antitestként CC-49 és B72-3 antitesteket alkalmaztunk (B72’3 hibr idoma sejtvonal, ATCC HB 8108 számon deponálva), amely mindkettő patkány monoklón antitest, amely a tumorral kapcsolatos antigénhez a TAG-72 epitóphoz kapcsolódik. I,5xl0-5 mmól (0,5 mCi) [-iosRhiBITC^.S^-tetiCh]4 komplexet nitrogén atmoszférában 1,5 ml-es Eppendorff csőben szárazra pároltunk, majd hozzáadagoltunk 0,1 ml megfelelő antitestet (10 mg/ml 0,1 mólos Na2C03-ban, pH = 9,5), és a kapcsolást 1 órán át szobahőmérsékleten végeztük. A kapott 105Rh jelzett antitestet ezután centrifugálásos gélszüréssel elválasztottuk és az antitest integritást standard biokémiai és immunológiai eljárással igazoltuk. 17b. Példa l0SRh jelzett antitestek in vivo lokalizálása A 105Rh jelzett antitestek hasznosságát athymiás egerek esetében határoztuk meg oly módon, hogy humán tumor xenográf segítségével meghatároztuk a felvett anyag mennyiségét. A kísérlethez nőstény egereket (Nu/ /Nu) szubkután (S.C.) humán vastagbél karcinóma sejtvonallal (LS-174T, körülbelül 4 x x 10® sejt/kisérleti állat) megfertőztünk, majd körülbelül 2 héttel a fertőzés után minden állatnak a farok vénán keresztül 3 /uCi (15 ug) 105Rh jelzett antitestet (CC-49 vagy B72-3) adagoltunk. A kísérleti állatokat ezután különböző időintervallumok eltelte után leöltük, a daganatot és a kiválasztott szövetet kivágtuk, mértük és meghatároztuk a radioaktivitást gamma számláló segítségével. A beütés/perc/g 105Rh értéket minden szövet esetében meghatároztuk és a beadagolt injekció mennyiségének függvényében fejeztük ki. A kapott eredményeket a következő táblázatokban foglaljuk össze. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 11
