201332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortartalmú 2-izoxazolinok és -izoxazolok, valamint ilyen vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
53 HU 201332 B 54 3. Krónikus Craft-versus-Host-reakció vizsgálata egereken A transzplantátumból kiinduló és a fogadószövettel szemben immunreakció okozta Graft-versus-Horst-betegséget akut, majdnem mindig halállal végződő lefolyásakor a lép megnagyobbodásával, májduzzadással, a nyirokcsomó hioertrófiájával, hemolitikus anémiával, csökkent immunglobulin- és komplement-szinttel, továbbá kisebb immunreaktivitással lehet jellemezni. A betegség valamivel enyhébb lefolyás esetén nyirokmirigy-bántalomhoz, immunkomplexglomerulonephtritis-hez (vesék kétoldali gyulladása) és nem szervspecifikus autoantitestek burjánzásához vezet. Az ugyancsak autoimmun-betegségek körébe tartozó szisztémiás Lupus erythematodes hasonló kórképet mutat. A találmány szerinti vegyületeknek a (DBA/2 x C57B1/6) Fi-generációjú nőstény egereken vegyes lép- és thymus-sejteket tartalmazó két injekció által kiváltott Graftversus-Host reakció lefolyására gyakorolt hatását S. Popovic és R. R. Bartlett módszere [Agents and Actions 21, 284-286 (1987)] szerint vizsgáltuk, amelynek során 7 napon keresztül minden alkalommal 5 x 107 ugyancsak nőstény donor-állatokból nyert DBA/2-sejteket 0,2 ml kultúrában intravénásán adagoltunk. A betegség kitörésének és lefolyásának biztosabb megitélése céljából minden kísérletnél negativ kontrollként egészséges állatokat figyeltünk meg. A beteg állatok 6 hetes orális kezelését az első donorsejtes injekció beadása utáni 21. napon kezdtük el, miközben a vizsgálati anyaggal vagy a tiszta vivőanyaggal (pozitív kontroll) napi egyszeri kezelést alkalmaztunk. Vivőanyagként literenként 100 mg karboxi-metil-cellulóz-nátrium-sót tartalmazó vizes oldatot használtunk. A kezeléshez 10 ml/kg testtömeg adagolást alkalmaztunk. Az egyes kisérleti csoportok 10 állatból tevődtek össze. A készítmény hatékonyságát a fehérje-vizelés és a Graft-versus-Host-index gátlása alapján Ítéljük meg. A beteg állatoknál a glomerulumok bazális membránjainál lerakódó immunkomplexek okozta nefron-zavarok miatt jelentős, a gromerulonephritis mértékével összefüggő fehérje-vizelés lép fel, ami a vizelettel kiürülő protein mennyiségének mérésével mennyiségileg meghatározható. A második mérhető paraméter a Graft-versus-Host-index, amely a Graft-versus-Host-reakció által előidézett erőteljes lépmegnagyobbodást (splenomegalia) jellemzi. Az index a beteg állatok lép- és testtömeg változásának, illetve a negativ kontroli-csoport egészséges, kezeletlen állatainak megfelelő tömegei változásának hányadosaként határozható meg és a betegség súlyosságának megbízható jellemzője, vagyis minél nagyobb az index, annál súlyosabb a betegség. A vizsgálatok 5. táblázatban összefoglalt eredményei alátámasztják, hogy az (I) általános képletű vegyületek a Graft-versus-Host-betegséget az autoimmun-folyamatokra kifejtett moduláló hatásuk miatt tartósan enyhíteni tudják. 5. táblázat A fehérje-vizelés és a Graft-versus-Host-index gátlása Vegyület (előállítási példa száma Dózis mg/kg/nap per os %—OS fehérje-vizelés gátlás Graft-vei— sus-Horst-index 15 27 16 54 50 64 18 15 76 54 63 30 61 48 4. Az amino-peptidázok enzimaktivitására kifejtett hatása Az amino-peptidáz B enzimaktivitásának L-lizin-2-naftil-amidra szobahőmérsékleten kifejtett hatását fotometriásan meghatározzuk. Az enzimhez adott 0,1-100 jug/ml koncentrációjú vizsgálati anyag az enzimaktivitás dózisfüggő elfojtásához vezet. Ezekből az adatokból számítható ki az enzimaktivitás 50%-os gátlásához (ICso) szükséges szubsztancia koncentrátuma. Hasonló módon vizsgálható a leucin-amino-peptidáz L-leucin-4-nitro-anilid enzim-szubsztrátumra gyakorolt hatása is. Az ICso értékeket a 6. táblázat foglalja össze. 6. táblázat Az amino-peptidáz gátló hatása Vegyület (előállítási példa száma Amino-peptidáz B ICso (Mg/ml) Leucin-amino-peptidáz ICso (pg/ml) 1. 65 13. 100 34. 22.5 24 35. 57 36. 56 37. 52 45. 92 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 29
