201118. lajstromszámú szabadalom • Eljárás amfotericin B kristályok előállítására fermentációs közegben
5 HU 201118 H 6 jából. Szobahőmérsékletre való lehűtés után az amfotericin kristályokat centrifugéléssal elkülönítjük, és 2 kPa nyomáson 25 °C-on 3 óra hosszat szárítjuk. Az így kinyert kristályok milligrammonként 79 wg amfotericin B-t 5 tartalmaznak, ami 95%-os összesített kitermelés. 3. Példa Enzimes kezelés és hőkezelés. A 2. példa szerinti eljárást követve a fermentlének az amfotericin B kristályosodá- 15 sát kiváltó néhány percig 120 °C-on való kezelése után a fermentlevet lehűtjük, és 35 °C-on és körülbelül 7,0 pH-n tartjuk; ezután lizozimot adunk a ferinentléhez, és 2 óra hosszat reagáltatjuk a micélium sejtek részleges oldása céljából. A lizozimot 4000 egység*/ml fermentlé koncentrációban adagoljuk. (+ Egy egységnyi az az enzim-aktivitás, amely 6,24 pH-nál 26 °C-on percenként 0,001 aA45o-et abszorpcióváltozás 450 nm-nél 25 eredményez.) Az amfotericin B kristályokat utána centrifugálással különítjük el a fermentléböl, és acetonnal szárítjuk. Az ilyen por még a 2. példa termékénél is magasabb amfotericin B tartalmú, azaz 110 ug amfotericin B-t tartalmaz 1 mg kristályban. 4. Példa Beoltás A 2. példa szerinti eljárást követjük azzal a kivétellel, hogy 0,1 g/lit. amfotericin B kristályt adunk a fermentléhez a fermentáció kezdete után 40 órával. A hökezelési művelet végén (a fermentáló ció után) nyerjük ki az amfotericin B kristályokat. 5. Példa Amfotericin B kristályok előállítása oldhutó fermentációs táptalajban. A fermentáció szempontjából ez a példa 20 azonos az 1. példával kivéve, hogy a fermentációs táptalajban 2,5% szójaolaj helyett 1,25% oldható formájú porlasztva szárított kukoricalekvárt (szállítója a Roquette Corporation) használunk. A fermentlevet körülbelül 75 °C-on 15 percig melegítjük. A hőkezelés után a fermentlé amfotericin B kristályokat és részben oldott micéliumot tartalmaz. Az amfotericin B kristályokat ezután centrifugálással különít- 30 jük el a folyadéktól, és 2 kPa nyomóson és 25 °C-on 3 óra hosszat szárítjuk. Az összesített amfotericin kitermelés 95%, A találmány szerinti eljárással kapott amfotericin B-t autentikus amfotericin B min- 35 tóval összehasonlítva metanolban felvett UV-spektrum alapján azonosítottuk, amelynek jellemző maximuma 381 nm, minimuma 372 és 396 nm. 5
