201117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenil-(2,3-epoxi-1-propil)-éterek sztereospecifikus előállítására
13 HU 201117 B 14 dattal meglúgosítjuk. A keletkező fehér csapadékot 3 x 100 ml diklór-metánnal extrahóljuk, az extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A kapott fehér szilárd anyag hexán/etil-acetát elegyból végzett átkristályositásával 76 mg (-)-Atenololt kapunk, amelynek olvadáspontja 146-148 °C; [oCPo = -3,9° (c = 1,01; etanol). A protonmégneses rezonanciaspektrum (CHCb, 360 MHz) adatai: é 1,1 (d, 6H, Cfh); 6 1,5-2,5 sáv (s, 2H, NH, OH)-, é 2,82 (m, 1H, NHCH); & 2,75/2,95 (m, 2H, CHiNH); i 3,53 (s, 2H, CO-C/ft); é 3,98 (m, 3H, -O-CTft-CH-); ó 5,35 sáv (s, 2H, NH2); & 6,9 (d, 2H, para-szubsztituált aromás); & 7,2 (d, 2H, para-szubsztituált aromás). A kémiai ionizációs (NH3) tömegspektrum egy m/e 267 (M+H)* molekuláris iont adott, 266 molekulasúlyt jelezve, ami egyezik a feltételezett tömeggel. A protonmágneses rezonanciaspektrum és a tömegspektrum azonos a kémiailag előállított (í)-Atenolol hasonló adataival. Az (-)-Atenolol optikai tisztaságát dibenzoil-borkósav-monoészter diasztereomer-származékainak fordított fázisú nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás oszlopon [Lichrosorb RPS <10 u m), 25 cm x 1/4” (6,35 mm) külső átmérő, 4,9 mm belső átmérő, mozgó fázis 2% ecetsav (pH 3,7-ra ammóniával) 50:50 metanol, 1,5 ml/perc.] való elválasztásával határozzuk meg. A származék készítését ( + )- vagy (-)-Atenolol (R,R)-0,0-dibenzoil-borkősavanhidriddel a W. Linder és munkatársai által a J. Chrom. 316, 605-616 (1984)-ben leírtak szerint való reagáltatásával végezzük. A (±)-Atenololból készített származék analízise két közel egyenlő intenzitású diasztereomer csúcsot mutat, mig a (-)-Atenololból készített származék esetében a két csúcs intenzitásának aránya 1,5:98,5, ami 97,0%-os optikai tisztaságnak felel meg. 10. példa (4-Allil-oxi-fenil)-acetainid átalakítása Pseudomonas oleovorans ATCC 29347-tel [4-(2,3- -epoxi-propoxi)-fenil]-acetamiddá. Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 szuszpenziót készítünk (0,75% glicerint és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazó PSX ásványi sós táptalajban 7 pH-nól 30 °C-on 24 óra hosszat tenyésztett) sejtek 7,5 pH-nál az eredeti sejttenyészet térfogata egytizedének megfelelő térfogatú PSX táptalajban való reszuszpendálá sóval. 10 ml (12,6 g/liter szárazsúly) sejtszuszpenziót egy 250 ml-es ledugaszolt Erlehmeyer-lombikban vízszintes körkörös rázógépen 30 °C-on inkubálunk 0,5 ml 90 mg/ml töménységű golyósmalomban őrölt és ultrahanggal homogenizált (4-allil-oxi-fenil)-acetamid szuszpenzióval, amely még 50 mg/ml Tween 80-at is tartalmaz. 1 ml-es mintákat 2 ml diklór-metánnal extrahálunk, az oldószert ledesztilláljuk, majd a maradékot a (9. példában a 4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil]-acetamid analízisére leirt körülmények között végzett} nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás analízis előtt dimetil-formamidban oldjuk. Az inkubációs elegyben a [4-(2,3-epoxi-propoxi)-fenil]-acetamid szintje 0,9 g/liter illetve 1,3 g/liter 3 óra illetve 24 óra inkubálás után. 11. példa (4-Allil-oxi-fenil)-acetamid átalakítása Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036-tal, Pseudomonas aeruginosa NCIB 8704-gyel és Pseudomonas putida NCIB 9571-gyel [4-(2,3-epoxi-propoxil-fenilj-acetainiddá. Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036, Pseudomona aeruginosa NCIB 8704 és Pseudomonas puLida NCIB 9571 sejtszuszpenziókat készítünk (0,75% nátrium-laktátot és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazó PSX ásványi savas táptalajon, 7 pH-n, 30 °C-on 24 óra hosszat tenyésztett) sejteknek az eredeti sejttenyészet térfogata egytizedének megfelelő térfogatú 7,5 pH-jú PSX-tóptalajban való reszuszpendólásával. 10 ml sejtszuszpenziót vízszintes körkörös rázógépen 250 ml-es ledugaszolt Erlenmeyei—lombikok ban 0,5 ml 10%-os töménységű golyósmalomban őrölt (2-allil-oxi-fenil)-acetamid szuszpenzióval (amely még 5% Tween 80-at is tartalmaz) 30 °C-on inkubálunk. Az inkubációs elegyeket 24 óra múlva diklór-metánnal extraháljuk, és a következő [4- -(2,3-epoxi-propoxi)-fenil]-acetamid koncentrációkat találjuk: Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036-nál 0,07g/liter; Pseudomonas aeruginosa NCIB 8704-nél 0,08 g/liter; Pseudomonas putida NCIB 9571-nél 0,19 g/liter (analízis nagyhatékonyságú folyadékkromatogrófióval, mint az előbbi példákban). 12. példa Allil-[4-(2-metoxi-etil)-fenil-éter átalakítása glicidil-[4-(2-nietoxi-etil)-fenil]-éterré Pseudomonas oleovorans ATCC 29347-tel. Pseudomonas oleovorans ATCC 29347 szuszpenziót készítünk (0,75% glicerint és 0,05% dietoxi-metánt tartalmazó 7 pH-jú PSX ásványi sós táptalajon 30 °C-on állandó fázisig tenyésztett) sejteknek az eredeti sejttenyészet térfogata egytizedének megfelelő térfogatú 7,5 pH-jú PSX táptalajban való reszuszpendálá sóval. Egy 250 ml-es Erlenmeyer lombikban 10 ml (12,6 g/liter szárazsúlyú) sejtszuszpenziót inkubálunk vízszintes körkörös rázó5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
