201116. lajstromszámú szabadalom • Eljárás megfelelő feltételek között szabályozatlan replikációs viselkedésű plazmidok előállítására
45 HU 201116 B 46 raensére cseréljük, a kapott plazmidot E. coliba transzformáljuk, és a transzformánsokból a plazmidot kívánt esetben kinyerjük; k) E. coli CSH50 torzsben, DSM2483 számon deponált pOU91 plazmid előállítására a j) lépés szerinti módon kapott plazmidot EcoRI enzimmel emésztjük, ennek helyére pKN184 plazmid EcoRI-A fragmensét iktatjuk, a kapott plazmid méretét BamHI enzimmel teljesen és Sau3A enzimmel részlegesen emésztve csökkentjük, a kapott plazmidot E. coliba transzformáljuk, és a transzformánsokból a plazmidot kívánt esetben kinyerjük; l) E. coli CSH50 törzsben, DSM2757 számon deponált pOUlOl plazmid előállítására a g) lépés szerinti módon kapott plazmid BamHI helyére Sau3A fragmenst iktatunk, a kapott plazmidot E. coliba transzformáljuk, ampicillin-rezisztencia és X-fertőzés alapján transzformánsokat izolálunk, és ezekből a plazmidot kívánt esetben kinyerjük; m) E. coli CSH50 törzsben DSM2759 számon letétbe helyezett pOU130 plazmid előállítására a k) lépés szerinti módon kapott plazmidot BamHI enzimmel emésztjük, a BamHI helyet Bal31 exonukleázzal eltávolítjuk, a kapott plazmidot EcoRI és Clal enzimmel emésztjük, pMC1403 plazmidból származó EcoRI-Clal fragmenssel ligáljuk, a kapott plazmid BamHI helyére copB gént tartalmazó BglII fragmenst iktatunk a kapott plazmidot E. coliba transzformáljuk, ampicillin-rezisztencia alapján laktóz indikátor lemezeken transzformánsokat izolálunk, és ezekből a plazmidot kívánt esetben kinyerjük; n) E. coli CSH50 törzsben, DSM2718 számon letétbe helyezett pLC31 plazmid előállítására a g) lépés szerinti módon kapott plazmidot BamHI enzimmel emésztjük, pBEU14 plazmidból származó BamHI fragmenssel ligáljuk a kapott plazmidot E. coliba transzformáljuk, és a transzformánsokból kívánt esetben a plazmidot kinyerjük; o) E. coli C600 törzsben, DSM2945 számon letétbe helyezett pLC33 plazmid előállítására az a) lépés szerinti módon kapott plazmid EcoRI helyére EcoRI enzimmel emésztett pLC28 plazmidot iktatunk, a kapott plazmidot BamHI és Bal31 enzimmel emésztjük, ligéljuk, és E. coliba transzformáljuk, transzformánsokat izolálunk kanamicin- és ainpicillin-rezisztencia alapján, és a transzformánsokból kívánt esetben a plazmidot kinyerjük; p) E. coli C600 törzsben, DSM 2946 számon letétbe helyezett pLC34 plazmid előállítására az a) lépés szerinti módon kapott plazmid EcoRI helyére EcoRI enzimmel emésztett pLC28 plazmidot iktatunk, a kapott plazmidot BamHI és Bal31 enzimmel emésztjük, ligáljuk, E. coliba transzformáljuk, traszforménsokat izolálunk kanamicin-rezisztencia és ampicillin-érzékenység alapján, és a transzformánsokból a plazmidot kívánt esetben kinyerjük. 5 (Elsőbbsége: 1982. 09. 16.) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy E. coli CSH50 törzsben, DSM2758 számon letétbe helyezett pOUllO plazmid előállítására a 3. igénypont i) lépés 10 szerinti módon kapott plazmidot BamHI enzimmel teljesen és Sáli enzimmel részlegesen emésztjük, és pVH1451 plazmid EcoRI-Clal fragmensével ligáljuk, a kapott plazmidot BamHI és BglII enzimmel részlegesen eraészt- 15 jük, ligáljuk, és E. coliba transzformáljuk, transzformánsokból a plazmidot kívánt esetben kinyerjük. (Elsőbbsége: 1982. 09. 24.) 20 25 30 35 40 45 50 55 Kiadja az Országos Találmányi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: dr. Szvoboda Gabriella osztályvezető R 4962 - KJK 90.3348.66-13-2 Alföldi Nyomda Debrecen - Felelős vezető: Szabó Viktor vezérigazgató 25
