201114. lajstromszámú szabadalom • Eljárás treponema hyodysenteriae bakterin előállítására
7 HU 201114 B 8 meg; az életképes sejtek számát sorozathígitóssal állapítjuk meg frissen öntött, 5%-os marhavér-agarlemezeken. A vér-agar-lemezeket 37 °C hőmérsékleten, 59 térf.X hidrogénből és 50 térf.X szén-dioxid bői álló anaerob atmoszférában 4 napon ét inkubáljuk. A T. hyodysenteriae kolóniákat egyedi hemolízis-zónákként figyeljük meg. E vizsgálatok eredményét az alábbi 1. táblázatban össze- 5 geztük. 1. táblázat T. hyodysenteriae ATCC 31212 sejtek szaporodása koleszterinben gazdag szarvasmarha-frakciót tartalmazó és nem tartalmazó táptalajon Táptalaj Mikroszkópos vizsgálat Összes sejtszám Az élő sejtek száma Koleszterin-frakció nélkül Lazán csavarodó, viszonylag hosszú, vékonyfalú sejtek; általában inaktívak 1,3 x lOVml 3,7 x 107/ml Koleszterint tartalmazó frakcióval Szorosan csavarodott, rövidebb, vastagabb falú sejtek; aktívak 2,6 x lOVml 1,4 x 109/ml ------------»------A fenti adatokból látható, hogy koleszterinben gazdag szarvasmarha-frakció jelenlétében az összes sejtszám kétszeresére nő, az életképes sejtek száma 100-szorosóra növekszik, és a frakció pozitív hatást fejt ki a sejtek morfológiájára is. 30 2. példa T. hyodysenteriae ATCC No. 31212 sejtekből az 1. példában leirt módon oltásra alkalmas tenyészetet állitunk elő, amelyet felhasználunk 3, egyenként 500 ml térfogatú edény tartalmának 3 térf.%-os oltására. Mindhárom edény egyenként 200 ml triptikus szójalevest, 1% élesztökivonatot, 3% bárányszérumot, 1% glükózt, 0,05% L-cisztein-hidrokloridot és 0,25 mg/ml B12 vitamint tartalmaz. (A százalékokat itt is és a továbbiakban is tömeg/térf.-ban adjuk meg). Az edények egyike (a kontroll) 2,5 térf.X 1. példa szerint előállított, koleszterinben gazdag szarvasmarha-frakciót tartalmaz. A második edény 2,5 térf.X Code 82-010 (Miles Laboratories cég) koleszterin-koncentrátumot tartalmaz. A harmadik edény 2,5 térf.X List 3200 (Biocell Laboratories) szarvasmarha-koleszterin-koncentrátumot tartalmaz. Az oltások elvégzése után az edényeket 10 térf.X hidrogént, 80 térf.X nitrogént és 10 térf.X szén-dioxidot tartalmazó anaerob atmoszférában 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk 38 órán át. A 24. és 31. órában az edény tartalmát 2 n nótronlúg hozzáadásával 7,0 pH-értékre állítjuk be. Mindegyik edény teljes sejtszámát a Petroff-Hauser számolókamrában állapítjuk meg. Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 2. táblázat T. hyodysenteriae ATTC No. 31212 sejtek szaporodása különböző, koleszterinben gazdag szarvasmarha-frakciókat tartalmazó táptalajokban A táptalaj összes kiegészítője sejtszám Az előnyös koleszterin-frakció (kontroll) 2,5 x lOVml 82-010 jelű koleszterin-koncentrátum 2,7 x lOVml List 3200 jelű szarvasmarha-koleszterin-koncentrátum 3,0 x lOVml A fenti adatok mutatják, hogy a különböző forrásokból származó, koleszterinben gazdag szarvasmarha-frakciók felhasználhatók a megkívántán magas T. hyodysenteriae sejtszám képződéséhez. 3. példa Az 1. példában leírt eljárást általában követtük T. hyodysenteriae ATTC No. 31287 törzs felhasználósával olyan táptalajokon, amelyeket az előnyös koleszterin-frakcióval egészítettünk ki a sejtek nagy koncentrációban való előállítása céljából. 4. példa Vakcinát vagy bakterint állítottunk elő úgy, hogy az 1. példában leírt módon az előnyös koleszterin-frakció alkalmazásával előál6
