201099. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 40926 antibiotikum mannozil-aglikon és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 201099 B 2 A találmány tárgya eljárás egy új antibiotikum, az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon előállítására oly módon, hogy az A 40926 antibiotikum komplexet vagy ennek A, B, PA, PB vagy Bo faktorát savas reakciókörülmények között hidrolizáljuk. A találmány tárgya továbbá eljárás az új antibiotikumot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. A szóbanforgó A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon olyan fertőző betegségek kezelésére alkalmas, amelyek az antibiotikumra érzékeny mikroorganizmusokkal kapcsolatosak. Az A 40926 antibiotikum komplex és faktorai Gram-pozitiv baktériumok és Neisseria-tőrzse ellen aktiv antibiotikumok, amelyeket Actinomadura törzsek termelnek. Egy, A 40926 antibiotikumot termelő, az Actinomadura genushoz tartozó törzset 1984. június 8-án helyeztünk letétbe az American Type Culture Collection-nál (ATCC, Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok), a Budapesti Szerződés rendelkezései szerint. Az A 40926 egy komplex antibiotikum, melynek öt komponensét különítették el és PA, PB, A, és Bo faktorként azonosították ezeket. Az A 40926 antibiotikumot és faktorait, valamint a termelő mikroorganizmusokat és az ezek előállítására irányuló eljárást a 177 882 számú európai - közzétett - szabadalmi bejelentésben írják le. Az eljárás során az Actinomadura sp. ATCC 39 727 mikroorganizmus törzset vagy ennek egy A 40926 antibiotikumot termelő variánsát vagy mutánsát aerob körülmények között, vizes táptalajban tenyésztik, majd a fermentléból kinyerik az A 40926 antibiotikum komplexet, melyet kívánt esetben tisztítanak és/vagy valamely ismert módon a komplexből az egyes faktorokat azaz az A, B, PA, PB és Bo faktort elkülönítik. Értelemszerűen az .A 40926 antibiotikum komplex' kifejezésen az öt említett faktor elegyét értjük. A fizikokémiai adatok alapján és ismert antibiotikumok szerkezetére való hivatkozással a A 40926 antibiotikum faktoroknak az (I) általános képlet tulajdonítható (a számozás analóg azzal, amelyet J. Williams a JACS 106, 4895-4908, 1984 helyen javasol); e képletben A jelentése -N-(ll-12 szénatomos)-acilamino-glukuronil-csoport és B jelentése mannozil- vagy acetil-mannozil-csoport, X1-X7, Ze és Zs jelentése hidrogénatom. Közelebbről az A 40926 antibiotikum A faktor olyan előbbi képlett! vegyület, amelyben A jelentése undekanoil-amino-glukuronil-csoport és B jelentése mannozil-csoport; az A 40926 antibiotikum Bo faktor olyan előbbi képletú vegyület, amelyben A jelentése izododekanoil-amino-glukuronil-csoport és B jelentése mannozil-csoport. Az A 40926 antibiotikum PA faktor és PB faktor annyiban tér el a megfelelő A és Bo faktortól, hogy a mannóz-egység helyett acetil-mannóz egységet tartalmaz. Legalábbis bizonyos fermentációs körülmények között az A 40926 antibiotikum PA és PB faktor az A 40926 antibiotikumot termelő mikroorganizmus fő termékei. Az A 40926 antibiotikum A, illetőleg B faktor főként az A 40926 antibiotikum PA, illetőleg PB faktor átalakulási terméke és gyakran mér a fermentlében jelen van. Azt találtuk, hogy az A 40926 antibiotikum PA faktor átalakítható A 40926 antibiotikum A faktorrá, és az A 40926 antibiotikum PB faktor átalakítható A 40926 antibiotikum B faktorrá, ha bázisos körülményeket alkalmazunk. Következésképpen ha a fermentlevet, vagy annak egy - az A 40926 antibiotikumot tartalmazó - kivonatát vagy koncentrátumát bizonyos időn át bázisos körülmények között állni hagyjuk (például egy éjjelen át, egy nukleofil bázis vizes oldatában, pH 9 fölött), olyan A 40926 antibiotikum komplexhez jutunk, amely feldúsult az A 40926 antibiotikum A faktor és B faktor tekintetében és amelyet AB komplexnek nevezünk. Az A 40926 antibiotikum mannozil-aglikon a következő tulajdonságokkal jellemezhető A) az 1. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdaaax(nm) a) 0,1 n HC1 280 b) pH 7,38 foszfát puffer 280; 300 (váll) c) 0,1 n káliumhidroxid 298 d) pH 9,0 foszfát puffer 282; 300 (váll) B) a 2. ábra szerinti IR abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm*1): 3700-3100; 3000-2800 (nujol); 1655; 1620- -1540; 1505; 1460; (nujol); 1375 (nujol); 1350-1250; 1210; 1150; 1020; 970; 850; 810 C) a 3. ábra szerinti 41-NMR spektrum, amely a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-en DMSO-d»-ban (hexadeutero-dimetil-szulfoxid (CF3COOH hozzáadásával felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalamazva (delta, ppm; multiplicitás; azonosítás): 2,51, s (DMSOds); 2,50, s (NCH3); 2,88, m <Z2); 3,30, m (Z’2); 4,08, m (X6); 4,44, d (X5); 4,49, d (X7); 4,83, m (X2); 5,02, s (4P); 5,08, s (Z6); 5,31, s (a mannóz anomer protonja); 5,53, d (X4); 5,78, s (4b); 6,08, d (X3); 7,70, s (6b); 6,44-8,52 (aromás és peptid NH-k) d = du b lett m = multiplett s = szinguleM 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
