201097. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán inzulin-származékok és az azokat tartalmazó nyújtott hatású gyógyszerkészítmények előállítására
17 IIU 201097 B 18 használva. A végső termék hozam 0,88 g, ez 29%-nak felel meg. DISC PAGE elektroforézis egy nagyobb sávot mutat, melynek migrációja 55%-kal tér el a sertés inzulin migrációitól. llPbC-vel kimutatott tisztaság 95%-os, a ve- 5 gyűlöl később eluálódik, mint a sertés inzulin. Az aminosav összetétel analízis azonosságot mutat a humán inzulinéval. 10 11. példa Az (1) általános képletú vegyületek in jók tálható oldatainak előállítása 15 Az (I) általános képletú vegyületek steril injektálható oldatait, a hosszú hatás fokának vizsgálata céljából, úgy készítjük, hogy izotonikumként 0,9% (súly/térfogat) nátrium-klorid és tartósítószerként 0,15% (térfo- 20 gat/térfogat) m-k rezol t alkalmazunk. Injektálható oldatokat készíthetünk még izotonikumként 1,6% (súly/térfogat) glicerint, tartósítószerként 0,3% (súly/térfogat) m-kl'ezolt alkalmazva és ezt 0,01 mólos nátrium-acetát- 25 tál pufferoljuk. A cinkion koncentrációját 0- -160 wg/ml határ között változtatjuk. Az oldatok pll-értékét az (I) általános képletú vegyületek izoelektromos pontjától eltérő értékre állítjuk be úgy, hogy az oldatok átlát- 30 szók legyenek 4 °C-on való tárolásnál. Az oldatok 240 nmól/ml (1) álLalános képletú \ együletet tartalmaznak. A 240 nmól/ml koncentrációt úgy állapítjuk meg, hogy 276 nin-nél mérjük egy m-krezol mentes, koncent- 35 ráltabb törzsoldat abszorpcióját, felhasználva ezen származékokra a sertés inzulinnak 6100-as moláris extrinkciós koefficiensét (lásd: Handbuch der Inneren Medizin, Vol 7/Part 2A, Editor: Oberdisse, 1975, 113) és felhasználva a monokomponens sertés inzulinra megállapított hatást, mely 28,5 U/mg szárazanyagra vonatkozik. (lásd: Diabetes Car, Vol. 6/Supplement 1(1983).41]. 1 U 5,95 nmólnak felel meg. Injektálható oldatokat készítettünk, amelynek az (1) általános képletú vegyületek 240 nmól/ml mennyiségét tartalmazzák: ezeket és a pH értékeket és cinktartalmat az 1. táblázatban mutatjuk be. Az inzulinhatás hosszabbítására vonatkozó vizsgalat A hipoglikémiás hatás meghosszabbítását., melyet az inzulin injektálható oldatai idéznek elő, éheztetett tengerinyulakon vizsgáljuk a British Pharmacopoeia 1980, A 142 szerint. Mindegyik tesztoldatot szubkutári adagoljuk 15,5 nmól/nyúl dózisban 6 vagy 12 állatba, melyek súlya 3-4 kg és a hipoglikémia lefolyását 6 órán keresztül követjük. Összehasonlításként gyorsan ható készítményt, ActrapidTM sertés inzulin alkalmazunk a vizsgálatokban. A vizsgálatok eredményeit az 1. és 2. táblázat mutatja. Egyes vegyületek hosszú hatására vonatkozó, nyulakon végzett kísérletek eredményeit, az 1. táblázat mutatja be. A glükóz érték 6 nyúlból számított átlagérték, a kezdeti érLékek %-ában. Az oldatokat 0,9% NaCl-dal tettük izotóniássá, tartósítószerként 0,15% (v/v) m-krezolt használtunk. L táblázat Az (1) általános képletú vegyületek injektálható oldatainak vizsgálata (I) általános képletú vegyület Zn*' Mg/ml pH Kezdeti glükóz % 6h l/2h lh 2h 4h LysBW-NH2 inzulin 0 4,5 53 54 49 79 100 LysB3u-NHz inzulin 80 4,5 63 62 63 73 80 LysB3U-NH2 inzulin 160 4,5 87 80 68 90 93 Argiao-NHz inzulin 0 4,5 57 51 65 81 ArgB3ü-NH2 inzulin 80 4,5 76 68 63 73 78 ThrB3ű-NHz inzulin 0 4,2 46 46 39 64 91 ThrB30-NH2 inzulin 160 4,2 64 58 50 70 69 ThrB30-OBu* inzulin 0 4,0 59 65 59 79 100 ThrB30-OBul inzulin 160 4,0 81 75 62 66 88 ThrB30-(Bu*)'-OBu1 inzulin 0 4,0 64 60 54 71 82 ArgB3ü-ArgB31-NH2 inzulin 0 4,5 72 70 68 67 68 A,.gWo_ArgMi_NH2 inzulin 160 4,5 91 87 78 73 68 ActrapidTM sertés inzulin 15 7 53 48 42 70 98 11
