201097. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán inzulin-származékok és az azokat tartalmazó nyújtott hatású gyógyszerkészítmények előállítására
3 HU 301097 B 4 Közelebbről a találmány szerinti, a gyakorlat számára érdekes vegyuleteket a következők jellemzik: az A17 és 1113-helyzetű glutaminsuvak közül egy vagy kettő helyett glutaiuiri áll; és/vagy a B27-helyzetű treoriinrész L-argininnal vagy L-lizinnel helyettesített; és/vagy a B3ü-helyzetű treoniricsoport helyett lizin vagy ai-giriin lehet, és az N-terminális karboxilcsoport a B láncban aminocsoporttal védve van. A találmány tárgyát képezi a fent jellemzett humán inzulin analógok oldatainak előállítására is, melyek kontrollált cinkion tartalommal rendelkeznek. Az inzulin nyújtott hatása ezáltal csapadékképzödés nélkül biztosítható. Meglepő módon azt találtuk, hogy kombinált rövid és nyújtott inzulin hatású injektálható oldatokat készíthetünk úgy, hogy hatóanyagként egyetlen, (I) általános képletül inzulinszármazékot alkalmazunk', ahol az A és B betűk, melyeket zárójelben lévő számok követnek, az A-, illetve a B-láncúak a zárójelben lévő számokkal jelzett peptidfragmenseit jelölik, E» és E4 jelentése Glu, E2 Glu vagy Gin, E3 Glu vagy Gin, X Thr, Lys vagy Arg, V Thr, Lys vagy Arg, Z jelentése Lys vagy R aminocsoport, n értéke 0 vagy 1, és m értéke 1, azzal a megkötéssel, hogy E2 és E3 közül legalább az egyik Glu-tól eltérő jelentésű, ha X jelentése Thr. Az (J) általános képletü vegyületekben a B-lánc C-terminális karboxilcsoportja egy aminocsoporttal van blokkolva, ezáltal eltűnik a karboxilcsoport negatív töltése. A töltésváltozás, melyet az aminocsoport bevitele hoz létre B30-helyzetben, tovább növelhető azzal, hogy a B27-helyzetben lévő treonint arginirinel vagy lizinnel szubsztituáljuk és/vagy az A17- és B13- és B21 helyzetben lévő glutaminsav bármelyikét glutaminnal helyettesítjük. Továbbá egy pozitív töltést bevihetünk egy bázikus aminosavval a B30- és/vagy a B-31- helyzetbe. Mivel az (1) általános képletü vegyületeket olyan oldatok alakjában használhatjuk fel a klinikai gyakorlatban, melyek elhúzódó hatásúak, az immunogeniLás csökkenése fordulhat elő összehasonlítva a közönségesen használt sertés-, vagy humán inzulin szuszpenziókkal. A hatás elhúzódásának mértékét növelhetjük és kontrollálhatjuk cinkionok hozzáadásával. Jelentősebb paraméterek, melyek az inzulinhatás elhúzódásának fokát szabályozzák: a cink koncentráció és az (1) általános képletű vegyület kiválasztása. Bizonyos analógokkal, pl. Arg®27, ThrB3u-Nll2 humán inzulinnal erősen elnyújtott hatást érünk el csak 3 cinkatommal az inzulin analóg hexamer egységére számítva, amely 8 pg cink/ml-nek felel meg olyan készítményben, amely kb. 210 nmól/ml-t tartalmaz. Más analógokkal, pl. a l.ysl,30-Nlh humán inzulinnal, a hatás mérsékelt hosszabbítását érjük el inzulin analóg hexameterenként számítva 30 cinkkel, amely 80 m6 cink/ml-nek felel meg olyan készítményben, mely kb. 240 nmól/ml-t tartalmaz. A kedvező cink koncentráció-tartomány 0- -2 mg/ml között van, előnyösen 0-200 Mg/ml cink, a B13- és/vagy B27- helyzetű szubsztitúció esetén és előnyösen 20-200 Mg/ml más analógok esetén. Az (1) általános képletü vegyületek oldatainak elhúzódó hatása cinkionok jelenlétében az ilyen vegyületek semleges pH-nál való kis oldhatóságának tulajdonítható. Csak az olyan inzulinszármazékok oldatai, melyekben a B-lánc C-terminálisa blokkolva volt, mutattak erősebben elhúzódó hatást, mint az Actrapid T" sertés inzulin. [Protein Engineering 1 (3) 205-213 (1987)1. A találmány szerinti injektálható oldat pll-jának előnyösen a fiziológiás pll-érték alatt és ahhoz a lehető legközelebbi értéken kell lennie, a pH felső határa ott van, ahol csapadék válik ki. Stabilis oldatokat, melyek kb. 240 nmól/ml (I) általános képletü vegyületet tartalmaznak, 5.5-pH értéknél nyerünk. A felső határ az oldat összetevőitől - úgymint izotonikuin, tartósítószer és cinkkoncentráció - és az (I) általános képletü vegyület megválasztásától függ. Nincs alsó pH-határa az oldatoknak, de mivel az inzulinok kémiai stabilitása savas oldatokban kicsiny, ami deamidációs reakciók, és dimerek képződésének tulajdonítható, a pH értéke kedvezően a lehető legnagyobb legyen az oldat fizikai stabilitását tekintetbe véve. A találmány szerinti injektálható oldatok előnyös pll-tartomanya 2,5-8,5 között van, még kedvezőbben 4,5-8,0 között. A találmány további szempontja, hogy nagyobb rugalmasságot tesz lehetővé a paciensek számára. Két vizes oldattal, melyből az egyik egy (I) általános képletü vegyületet, és a másik egy cinksót tartalmaz, a páciens a kívánt mértékű elhúzódó hatást tudja elérni, és egy kívánt profilt, megfelelően elegyítve a két oldatot. így a paciensnek, két alapoldatoL használva, lehetősége van arra, hogy kiválasszon egy hatást és profilt a reggeli injekcióra és egy másik hatást és profilt az esti injekcióra. A cinkoldat előnyösen kb. 10 Mg és 20 mg közötti mennyiségű cinket tartalmaz ml-enként. Alternative mindkét alapoldal tartalmazhat cinket, akár azonos, akár különböző koncentrációkban és/vagy mindkét alapoldat tartalmazhat egy (1) általános képletü vegyületet, akár azonos, vagy különböző vegyületeket. A találmány szerinti injektálható oldatok előnyösen kb. 60 és 6000 nmól/1 koncentrá-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
