201075. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-/(piperidin-4-il)-metil/-benzofuro/2,3-c/-piridin-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 IIU 201U75 D Ő Táblázat (I) általános képlet Szám R Só O.p. (°C) 1 C6H5-CH2-dihidroklorid 285-288 2 CsHs-CO-benzolszulfonót 203-204 3 3-C1-C6H4-CO-benzolszulfonát 166-168 4 3-CH3-C6ÍI4-CO-benzolszulfonát hemihidrát 166-169 5 C2H5-O-CO-fumarát 167-170 A találmány szerinti vegyületekkel számos farmakológiai próbát hajtottunk végre, amelyek a vegyületek terápiás hatékonyságát igazolják. Így a vegyületek tárgyát képezték olyan vizsgálatnak, amely a patkány hippocampusában jelenlévő, 5-HTu típusú szerotoninerg receptorok iránti affinitásuk kimutatására alkalmas. A vegyületek megszüntetik egy izotóppal jelzett specifikus ligandnak, a [3Hj-8- -hidroxi-2-[bisz(n-propil)-amino]-tetralinnak [a továbbiakban [3H]-8-OH-DPAT, amelyet Gozlan és munkatársai írtak le: Nature 305, 140-142 (1983)] az 5-HTu receptorokhoz való kötődését. 160-200 g súlyú hím Sprague-Dawley patkányokat használtunk a kísérletekhez. Fejlevágás után kiemeljük az agyat és kivágjuk belőle a hippocampust. A szövetet Ultra-Turrax Polytron készülékben 30 másodpercig, a maximális sebesség felével homogenizáljuk sósavoldattal pH 7,4-re beállított 10 térfogat 50 mM Trisz-pufferben (100 mg friss szövet per ml). A homogenizált szövetet 4 °C-on háromszor mossuk, közben minden alkalommal 48000 g-vel 10 percig centrifugáljuk és az üledéket friss hideg pufferben szuszpendáljuk. Végül az utolsó centrifugálás után kapott üledéket annyi pufferben szuszpendáljuk, hogy 100 mg kiindulási szövet legyen 1 ml 50 mM pufferben. Ezután 37 °C-on 10 percig inkubáljuk a szuszpenziót. A [3H ]-8-OH-DPAT-vel (1 nM) való kötődés meghatározása céljából 10 pl membránszuszpenziót 10 /uM pargillint tartalmazó 1 ml végtérfogatú pufferben inkubálunk. Az inkubálás után a membránokat Whatman GF/B szűrőkön gyűjtjük össze. A szűrőket 5 ml jéghideg pufferrel háromszor átmossuk. A szűrőket szcintillációs folyadékba helyezve radioaktivitásukat folyadékszcintillációs készülékben határozzuk meg. A [3H]-8- -OH-DPAT specifikus kötődését a szűrőkön visszamaradt radioaktivitásként definiáljuk, amely gátolható 10 pM 5-hidroxi-triptaminnal való együttes inkubálás útján. 1 nM [3H]-8- -OH-DPAT koncentrációnál a fajlagos kötődés a szűrön kimutatott összradioaktivitás 70- -80%-át teszi ki. A vizsgált vegyületek minden koncentrációjánál meghatározzuk a [3H]-8-OH-DPAT-vel való kötődés gátlásának százalékát, majd a kötődést 50%-kal gátló koncentációt, azaz 2Q az IC50 értéket. A találmány szerinti vegyületek IC50 értéke 0,001 és 0,3 mM közé esik. A találmány szerinti vegyületek centrális hatását macskán, a reszerpinnel indukált 25 .PGO-csúcsok"-ra (ponto-geniculo-occipitális csúcsok) kifejtett hatás alapján (PGO-R teszt) értékeljük Deporteere H. módszerével [Sleep 1976, 358-361. oldal (Karger, Bázel 1977)]. A vizsgálandó vegyületek kumulatív dózisait mesterségesen lélegeztetett, kurarizált macskáknak (0,01-3 mg per kg, iv.) 30 perces időközökben adjuk be, 4 óra múlva 0,75 mg per kg reszerpin ip. injekciója után. Az elektroenkefalográfiás és fázisos aktivitásokat (PGO-R csúcsok) agykérgi és mély elektródok segítségével (oldalsó geniculum) határozzuk meg. A vizsgált vegyület minden dózisára meghatározzuk a PGO-csúcsok szá- 4q mának százalékos csökkenését, majd az ADso értéket, azaz a csúcsok számát 50%-kal csökkentő hatásos dózist. A találmány szerinti vegyületek EDso értéke 0,01 és 3 mg per kg közé esik iv. adás esetén. 45 A próba eredményei azt mutatják, hogy az (I) általános képletű vegyületek in vitro erős és szelektív affinitást mutatnak az 5- -HTu típusú szerotoninerg receptorok iránt. 5q In vivo agonista, részlegesen agonista vagy antagonista hatást mutatnak e receptorok szintjén. így a találmány szerinti vegyületek az 5-HTai típusú szerotoninerg receptorokat gg közvetve vagy közvetlenül befolyásoló betegségek kezelésére, nevezetesen depressziós, szorongásos állapotok, alvászavarok kezelésére, a táplálékfelvétel szabályozására, valamint ér- vagy szív-érrendszeri betegségek, mint gQ migrén és magas vérnyomás kezelésére használhatók. Ilyen célból megfelelő segédanyagokkal együtt orális vagy parenterális adagolásra alkalmas bármilyen formában elöállíthatók és gg napi 1-1000 mg dózisban alkalmazhatók. 6
