200987. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gem-dihalogén-1,8-diamino-4-aza-oktán-származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200987 B bonát és 50 mmól N-trisz(hidroxi-metil)-metil-glícin. A HCT sejttenyészeteket 10 jtm 7,7-difluorl,8-diamino-4-aza-oktán jelenlétében vagy enélkül inkubáljuk és 11 napig megfigyeljük. A sejtek tenyészetéhez használt táptalajt a 2., 4., 7. és 9. napon kicseréljük, hogy a sejtek logaritmikus fázisú szaporodását fenntartsuk. A tényleges sejtszámokat sejtszámlálással határozzuk meg, és a relatív sejtszaporodást kiszámítjuk, tekintetbe véve az alkalmazott különböző hígítási faktorokat. A sejtszaporodás százalékos gátlását a következő egyenlet szerint számítjuk ki: Ntn - ntO 100-100-------Nc-NcO az egyenletben: NcO a kontrolltenyészetek relatív szaporodása az O időpontban, Ncn a kontrolltenyészetek relatív szaporodása n időpontban, Nt a kísérleti tenyészetek relatív szaporodása O időpontban, és Nt a kísérleti tenyészetek relatív szaporodása n 15 időpontban. ' A klónozó hatásfok az életképesség mértéke, ezt használjuk annak meghatározására, hogy a kísérleti vegyület mint citosztatikus vagy citotonkus 5 szer működik. A klónozó hatásfokot úgy határozzuk meg, hogy 0,25-1,25 x 103 sejtet 60 mm-es műanyag petri csészében lévő 5-5 ml következő klónozó táptalajba oltunk: Swim 77 táptalaj, kiegészítve 10% (v/v) lószérummal, 11 mmól glikózzal, 10 2 mmól glutaminnal, 0,57 mmól dsztinnel, 1,8 mmól kalcium-kloriddal, 17,5 mmól nátrium-hidrogén-karbonáttal és 1 mmól N-trisz(hidroxi-metil)-metil-glicinnel. A petrícsészéket 37 °C-on, párásított inkubátorban, CC>2-levegő atmoszférában 15 (5%, v/v) 12 napig inkubáljuk, ekkor az élő sejtkolóniákat megszámoljuk és a kontrollal összehasonlítjuk. Az eredményeket az élő sejtkolóniák százalékos gátlásával fejezzük ki Az I. táblázat azt szemlélteti hogy ha a táptalaj- 20 hoz 10 p,mól 7,7-difluor-l,8-diamino-4-aza-oktánt adunk, az a 11. nap végén a sejtszaporodást 97%kal gátolja. Négy nappal a kísérleti vegyület beadagolása után a sejtek életképessége 72%-kal csökken. 25 I. táblázat 16 A 7,7-difluor-l,8-diamino-4-aza-oktán hatása HTC sejtek szaporodására és életképességére Idő (nap) Kontroll Relatív szaporodás Kísérleti vegyület A sejtszaporodás gátlása (%) Az életképes sejtkolóniák gátlása (%) 0 1,00 1,00 0 _ 1 1,83 1,46 45 21 2 3,67 2,92 28-3 7,29 5,57 27-4 c 14,1 5,99 62 42 6 55,8 12,5 78 _ 7 100 13,4 91-8 209 18,9 91-9 362 20,7 95 — 10 747 26,1 97-11 1133 30,2 97-A II. táblázat a 7,7-difluor-l,8-diamino-4-azaoktán (A vegyület) hatásait szemlélteti kombinálva az irreverzibilis L-ornitjn-dekarboxiláz inhibitorral a [2R,5R]-6-heptin-2,5-diaminnal (B vegyület). Ez a kísérlet azt mutatja, hogy a 100 pm [2R,5R]-6- heptin-2^-diaminnak a táptalajhoz adásával kapott 9
