200945. lajstromszámú szabadalom • Készítmény kontaktlencsék tisztítására és fertőtlenítésére
HU 200945 B hatásosabb fertőtlenítő készítményt alkotnak, mint a két komponens bármelyike külön-külön. 5. Példa Tart6sft6 hatás vizsgálata Három sorozat mikroorganizmus 3 tömeg/térfogat%-os hidrogén-peroxiddal (Dxysept I, Allergan Pharmaceuticals, Inc) és szubtilizin A-val vagy anélkül kapott extrapolált D-értékei közötti különbséget vizsgálatuk. A három sorozat mikroorganizmus a következő:- egy az USP XXI szerint megadott sorozat,- az EDA szerint megadott reprezentatív mikroorganizmusok lágy kontaktlencsék mikrobaellenes fertőtlenítése hatékonyságának megállapítására,- „izolált sorozat, amely a humán szervezetben előforduló vagy környezetének természetes flórájához tartozó mikroorganizmusokat, a kontaktlencsén esetleg lerakódó mikroorganizmusokat, vagy a kontaktlencsét tároló oldatban elszaporodó mikroorganizmusokat tartalmaz. A vizsgált mikroorganizmusok a IV. táblázatban szerepelnek A mikroorganizmusokat a mikrobiológiai gyakorlatban szokásos módon tenyésztjük. Minden mintát párhuzamos vizsgálatban vizsgálunk. A vizsgálat első lépéseként 10 ml 3 tömeg/térfogat%-os hidrogén-peroxidot pipettázunk csavaros tetejű vizsgáló csövekbe. A kiválasztott csövekbe 1 tabletta szubtilizin A-t adunk, amelynek összetételét az 1. példában ismertettük. A szubtilizint tartalmazó csöveket körülbelül 2 percig keverjük, hogy a szub-15 tilizin tabletta feloldódjon. Közvetlen ezután a csőbe beadjuk a vizsgált mikroorganizmust. Meghatározott érintkezési idő után a túlélő mikroorganizmusokat a telepképző egység/ml szám alapján 5 mennyiségileg meghatározzuk. A D-értékeket az elölési görbék extrapolálásával számítjuk ki aerob lemezszám eljárással. Ennek az eljárásnak a lényege a következő: a vizsgálati oldat alikvot részét azonnal a meghatározott érint- 10 kezésben tartási idő eltelte után eltávolítjuk, megfelezzük és két semlegesítő tápközeget tartalmazó vizsgálati csőben diszpergáljuk. A semlegesítő tápközegből tízszeres hígítási sorozatot készítünk úgy, hogy a visszanyerés kívánt szintjére egyenlítsük ki. 15 Alacsony visszanyerési szint esetén egy kis alikvot részt közvetlenül semlegesítő agar lemezre viszünk. A másik három hígítási sorozat csőből azonos térfogatú mintát viszünk semlegesítő agar lemezre. Minden lemezt 35-37 °C hőmérsékleten 20 inkubálunk 2-7 napig vagy kívánt esetben tovább. Megszámoljuk a telepeket, és ebből a D-értéket a következő módon számoljuk ki: az egyes lemezeken az azonos időtartamra kapott értékeket átlagoljuk. Az átlagértékeket féllogaritmusos papíron 25 ábrázoljuk, amely graflnonnak az ordinátáján a túlélők száma, az abszcisszáján az érintkezésben tartási idő szerepel. A kiindulási pontot (inokulum szint) összekötjük azzal a első ponttal, amelyik kevesebb mint 10 organizmus/ml értéket mutat. Az 30 így kapott egyenes 0 értékig való extrapolálása adja a D-értéket. Ezt a módszert egyébként végpont elemzésnek is nevezik. 16 IV. Táblázat Extrapolált pusztulási sebesség (D-értékek) 3 tömeg/térfogat % H2O2 (Oxysept I) hatására szubtilizinnel és anélkül Organizmus és ID # Szubtilizin nélkül Szubtilizinnel (1) USP XXI Panel Serratia marcescens, ATCC #14756 1,4 perc 1,0 perc Staphylococcus aureaus. ATCC #6538 3,4 perc 2,1 perc Pseudomonas aeruginosa, ATCC #9027 0,2 perc 0,2 perc Escherichia coli, ATCC #8739 1,0 perc 03 perc Candida albicans, ATCC #10231 20,0 perc 13,0 perc Aspergillus niger, ATCC #16404 10,0 perc 8,0 perc (2) „Soft Lens Panel (FDA) Serratia marcescens, ATCC #14041 1,7 perc 13 perc Staphylococcus epidermidis,, ATCC #17917 0,8 perc 13 perc Pseudomonas aeruginosa, ATCC #15442 0,6 perc 0,3 perc Aspergillus fumigatus, ATCC #10894 13,5 perc 23 perc Candida albicans, ATCC #10231 20,0 perc 13,0 perc (3) Különböző izolátumok Klebsiella pneumoniae, ATCC #13883 1,1 perc 0,6 perc Pseudomonas cepacia, ATCC #17765 0,4 perc 0,2 perc Proteus mirabilis, CSULB/VA 1,2 perc 1,0 perc 1,3 perc 0,9 perc Proteus vulgaris, ATCC #17313 0,4 perc 03 perc Candida parapsilosis, PM #4064 63,0 perc 55,0 perc Penicillium sp. (AquaTar isolate II) 2,5 perc 2,1 perc 0
