200945. lajstromszámú szabadalom • Készítmény kontaktlencsék tisztítására és fertőtlenítésére
HU 200945 B fehérjéhez kötve 2 vegyértékű fémiont, például kalcium-, magnézium- vagy cinkiont tartalmaznak. A proteolitikus enzimek előnyösebb csoportját képezik a szerin-proteázok, különösen azok, amelyek Bacillus vagy Streptomyces baktériumokból vagy Aspergillus penészekből származnak. Ezen a csoporton belül a legelőnyösebb enzimek a Bacillus eredetű lúgos proteázok, amelyeket általánosan szubtilizin enzimeknek neveznek. Hivatkozunk itt a következő szakirodalmi helyekre: Key, L., Moser, P.W. és Wildi, B.S., „Proteases of the Genus Bacillus. II alkaline Protesases. Biotechnology and Bioengineering, 12,213-249 (1970) és Key, L. and Moser, P.W., „Differentiation of Alkaline Proteases from Bacillus Species Biochemical and Biophysical Research Comm., 34, (5), 600-604, (1969). A szubtilizin enzimeket két alosztályra osztják, a szubtilizin A-ra és a szubtilizin B-re. A szubtilizin A-csoportba tartozó enzimek olyan fajokból származnak, mint a B. subtilis, B. licheniformis és B. pumilis. Ebbe az alosztályba tartozó organizmusok kevés semleges proteázt és amilázt termelnek, vagy egyáltalán nem termelik ezeket az enzimeket. A szubtilizin B alosztály olyan enzimekből áll, amelyeket a B. subtilis, B. subtilis var. amylosacchariticus, B. amyloliquefaciens vagy B. subtili NRR1 B3411 mikroorganizmusok termelnek. Ezek az organizmusok lúgos proteáz termelésükkel összemérhető mennyiségű semleges proteázt és amilázt termelnek. A fentieken kívül előnyös enzimek még a pankreatin, tripszin, kollagenáz, keratináz, karboxiláz, aminopeptidáz, elasztáz, aszpergillo-peptidáz A és B., pronáz E (S. griseus eredetű) és dispáz (Bacillus polymyxa eredetű). Az enzimek azonosítása, elkülönítése és tisztítása szakember számára ismeretes. Számos azonosítási és elkülönítési eljárás létezik, amelyeket az enzimek izolálásával foglalkozó általános szakirodalom ismertet, ezek közé tartoznak a proteolitikus, kevert proteolitikus és amilolitikus vagy proteolitikus és lipolitikus aktivitásokkal bíró enzimekre vonatkozó ismeretek. A peroxid-stabil enzimek, amelyekre a találmány megvalósításához szükség van, könnyen kinyerhetők ismert eljárásokkal növényekből, állatokból vagy mikrobiológiai forrásokból. A rekombináns DNS technika megjelenésével feltehetően a peroxid-stabil proteolitikus enzimek új forrásai válnak ismertté. Ezen enzimek alkalmazása is a találmány körén belül esik, amennyiben az előzőekben megjelölt stabilitási és aktivitási követelményeknek eleget tesznek. Ilyen proteázok rekombináns DNS eljárással Bacillus substilisből való előállítására példaként említjük a 6 0030-685. számú közzétett japán szabadalmi bejelentést. A találmány szerinti gyakorlatban hatásos mennyiségű enzimet kell alkalmazni. Ez olyan enzimmennyiséget jelent, amely ésszerű időn belül (például éjszakán át) lényegében minden, a normális viselés során lerakódó proteinszerű anyagot eltávolít a lencséről. Ezt a körülményt azokhoz a kontaktlencse viselőkhöz szabtuk, akiknél a protein felrakodás szokásos mértékűm nem ahhoz az igen kicsiny csoporthoz, amelynél időnként jelentősen megnövekedett arányú fehérje lerakódás jclentkez-5 hét, aminek folytán a lencse tisztítása két vagy három naponként ajánlatos. A hatásos tisztítás eléréséhez szükséges enzimmennyiség néhány tényezőtől függ, ezek közé tartozik az enzim aktivitása és peroxiddal adott szinergikus kölcsönhatásának összessége, amelynek kiemelkednek a többi, megfontolást érdemlő tényező közül. Általános mértékként az oldatnak annyi enzimet kell tartalmaznia, hogy az 0,0001-0,5 Anson egység aktivitás/ml oldat értéket, előnyösen 0,0003-0,05 Anson egység aktivitás értéket eredményezzen egy lencse kezelésre. Alkalmazható magasabb vagy alacsonyabb mennyiség is, azonban az alacsonyabb enzimkoncentráció olyan hosszú lencsetisztítási időt igényel, ami gyakorlati szempontból nem megfelelő. A magasabb enzimkoncentrációt tartalmazó odlatok gyorsabb tisztítást tesznek lehetővé, de a gyakorlati kezelés céljához mérten túl nagy anyagmennyiséget igényelnek. Minthogy az enzimkészítmények ritkán tiszták, az enzimforrásul szolgáló anyagot 0,003-15 tömeg/térfogat%-ban alkalmazzuk a végső munkaoldatra vonatkoztatva. Az enzim pontos mennyisége az enzim tisztaságától függően változó, pontos mennyiségét tekintve kell meghatározni. Az enzimaktivitás, mint minden enzim esetén, pH-függő, van egy olyan speciális pH-tartomány, amelyben az enzim működése a legjobb. Ennek a tartománynak a meghatározása szekember számára egyszerű. Előnyös, ha a találmány szerinti készítmény pH-ját az adott enzimre optimális tartományba állítjuk be, de ez nem feltétlenül szükséges. Peroxid forrásul bármely egy vagy több olyan vegyületet alkalmazhatunk, amelyből aktív oxigén jut az oldatba. Ilyen vegyületek például a hidrogénperoxid és alkálifémsói, a perborátsók, különösen monohidrátjaik és tetrahidrátjaik, a perszulfátsók, a karbonát-peroxid-sók, a diperoxi-izoftálsav-sók, a peroxi-difoszfát-sók és az alumínium-amino-hidroperoxid-sók. A legelőnyösebbek a hidrogén-peroxid és a perborátok és perszulfátok alkálifémsói, főként nátrium- és káliumsói. Fertőtlenítő mennyiségű peroxidon azt a peroxid mennyiséget értjük, amely a mikroorganizmus szennyezéseknek 3 óra alatt egy nagyságrenddel való csökkenéséhez elegendő. Előnyösebben, olyan peroxidkoncentrációt alkalmazunk, amely a mikroorganizmusok számát 1 óra alatt 1 nagyságrenddel csökkenti. Legelőnyösebb peroxidkoncentráció az, amely a mikroorganizmusok számát 10 perc vagy annál rövidebb idő alatt csökkenti 1 nagyságrenddel. Nem adhatunk meg valamennyi peroxidra azonos koncentrációt, mivel az egyes peroxidokból szabaddá váló aktív oxigén százalékos mennyisége lényegesen változó. Hidrogén-peroxid alkalmazásakor a 0,5 tömeg/térfogat% alsó koncentráció kielégíti az esetek többségében az előzőekben említett követelményeket. Előnyösen 1,0-2,0 tömeg/térfogat% hidrogén-peroxidot alkalmazunk, amely koncentráció mellett a 0,5 tömeg/térfogat% peroxid-oldat alkalmazásához mérten csökken a fertőtlenítés és tisztítás ideje. Legelőnyösebb a 3 tömeg/térfogat%-os 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
