200885. lajstromszámú szabadalom • Oldat szervek tartósítására
1 HU 200885 B 2 További előnyös készítmény a következő: Anyag Mennyiség 1 literben Laktobionsav 35,83 g Kálium-foszfát, egybázisos 3,40 g Raffinóz, pentahidrátx 17,83 g Magnézium-szulfát, heptahidrátx 1,23 g Adenozin 1,34 g Allopurinol 0,136 g Glutation (redukált) 0,922 Pentafrakció5“ 50,00 g Kálium-hidroxid (ION) 10,0 ml Nátrium-hidroxid vagy sósav, a pH beállításához 7,4 Injekciós célra alkalmas víz a térfogat 1,0 literre történő kiegészítésére 1,0 liter x Természetesen más hidrátok is alkalmazhatók, az ekvivalens mennyiség biztosítása érdekében. “ Az 1. példa szerint előállított hidroxi-etil-keményítő. Az előbbieknek megfelelően, a találmány a korábbinál hosszabb klinikai szervtartósítási időszakot biztosít, és valamilyen szintetikus kolloid alkalmazása a minimálisra csökkenti azokat a változásokat, amelyek a természetes eredetű anyagokból készített perfúziós oldatok esetében általában fellépnek. Az alábbi példák a találmány további szemléltetésére szolgálnak. 1. példa A hidroxi-etil-keményítő előállítása 100 g hidroxi-etil-keményítőt oldottunk fel desztillált- ionmentesített vízben, 10 tömeg %-os oldat előállítása céljából. A HES-oldatot - melynek molekulasúlya minimálisan 50.000 dalton volt - dializációs tasakokba (34 mm x 45,7 cm) töltöttük, majd 10-15 liter desztillált (ionmentesített) vizet tartalmazó tartályba helyeztük, és 72 órán keresztül rázattuk. A vizet naponta cseréltük, a HES-t összegyűjtöttük, és felhasználásig -20 C hőmérsékleten lefagyasztottuk addig, amíg molekulatömege 200.000-300.000 dalton, szubsztitúciós foka pedig körülbelül 0,4-0,5 volt. 2. példa Kutya hasnyálmirigyének 72 órás tartósítása A kísérletek során 15-25 kg tömeg, kevert fajú nősténykutyákat használtunk. Műtéti eljárás. Az anesztéziát pentotállal kezdtük és halotánnal tartottuk fenn. Középvonalbeli metszésen keresztül - az előzőekben leírtaknak megfelelően- kivettük a hasnyálmirigy baloldali szegmentumát (farki részét). Az átültetendő hasnyálmirigyszövetet- a hozzá kapcsolódó léppel együtt - vagy közvetlenül az átmosást követően (kontroll), vagy pedig 48, illetve 72 órás, hidegen történő tárolás után transzplantáltuk az artéria, illetve vena iliaca területére. A hasnyálmirigyvezetéket nyitva hagytuk, hogy biztosítsuk ezáltal a hasnyálmirigy-nedveknek a hasüregbe történő szabad elvezetését. Véralvadásgátló kezelést nem alkalmaztunk. A hasnyálmirigy jobboldali szegmentumát a transzplantációval egyidőben eltavolítottuk Kísérleti vizsgálati terv. Valamennyi kutyának 0,5 g Mandolt adtunk be intravénásán, a szervkivételt megelőzően, továbbá az átültetés utáni első három nap folyamán. Az állatokat standard kutyaétrenden tartottuk, mely Viokase-t tartalmazott. Az állatokat három csoportra osztottuk. Az 1. csoport (kontroll) esetében a szervkivétel és az átmosás után a szerveket azonnal transzplantáltuk; a 2. csoport esetében 48 órás tárolás történt; a 3. csoportnál pedig 72 órán keresztül tároltuk a szerveket. A vércukor-koncentrációt a transzplantációt követő első héten naponta, később pedig kéthetente határoztuk meg. Az átültetést követően 24 órával, 2 héttel és 4 héttel intravénás glükóz-tolerancia tesztet (IVGTT) végeztünk. Négy hét múlva eltávolítottuk az átültetett szerveket, majd 2-3 nappal ezután IVGTT-t végeztünk. Az IVGTT céljából glükózt (0,5 g/kg testtömeg kg) injiciáltunk az állatnak, majd meghatároztuk a vércukor-értékeket, a beadást követően 1, 5, 10, 20, 30, 60, 90 és 120 perc múlva. A K-értéket az 5-60 perces mérések során megállapított vércukor-koncentrációkból számítottuk ki (9). A több, mint 2 napon keresztül 150 mg %-nál magasabb vércukor- értékeket, valamint az 1,0-nél kisebb K- értékeket diabéteszre utaló jelnek tekintettük. Tartósítás. A tartósító oldat összetételét az 1. Táblázat mutatja be. Az eltávolítás után a hasnyálmirigyet körülbelül 250-300 ml átmosó oldattal - 60 cm-es magasságból - átmostuk. Az átültetendő szervet duplafalú műanyag zsákba helyeztük, majd tartósító oldatba merítve jeges vízfürdőbe tettük. Statisztikai elemzés. A statisztikai értékelést Student-„T” teszttel végeztük. A megadott értékek a következők: átlag ae SEM. Eredmények Valamennyi szervet alaposan átáramotattunk, közvetlenül az átültetést megelőzően. A tartósított szervek esetében 5-10 perccel a reperfuzió után különböző fokú intralobuláris ödéma alakult ki. A lépet minden esetben alaposan átáramoltattuk. Amint azt a 2. Táblázatban láthatjuk, öt kutya elpusztult, közülük három a kontroll csoportba tartozott, kettő pedig a 3. csoportba (72 órás tartósítás). A halál oka nem állt összefüggésben az átültetéssel, és valamennyi állat működőképes átültetett szervekkel pusztult el. A hasnyálmirigy-eltávolításkor valamennyi átültetendő szerv (még a kontrollok esetében is), különböző fokú fibrózis jeleit mutatta, és a lép esetében is hasonló volt a helyzet. Artériás és vénás trombózis nem volt megfigyelhető az átültetendő szervek egyikében sem. A 2. Táblázat feltünteti minden egyes állat esetében az átültetés utáni vércukor-értékeket, valamint az IVGTT eredményeit. A 2. Táblázatban valamennyi vizsgált csoport átlagértékei (+SEM) is megtalálhatók. A vércukor átlagértéke a transzplantációt követő első héten a 3. csoport esetében volt a legmagasabb (124±6 mg %), és ez az érték szignifikánsan különbözött (p<0,05) az 1. csoport (94+7 mg %), illetve 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
