200798. lajstromszámú szabadalom • Hatóanyagként ciklusos belső anhidridet, vagy annak szabad sav formáját, vagy ennek bázissal képzett sóit tartalmazó herbicid készítmények, és eljárás a hatóanyag előállítására
9 HU 200798B 10 gyével ekvilibráltunk — átfoiyatva adszorbeál juk. Az eluálást a fenti oldószereleggyel végezzük. Az eluátumot 10 ml-es frakciókban szedjük, és a kornexisztint tartalmazó frakciókat (13 —- 18. frakció) egyesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot egy hasonló Sephadex LH-20 töltetű oszlopon újból kromatografáljuk. Az eluálást és frakcionálást elvégezve 290 mg olajos anyagot kapunk. A fenti részlegesen tisztított olajos anyag teljes mennyiségét nagynyomású folyadékkromatogárfiás eljárással tisztítjuk tovább, fordított fázisú oszlopot használva. Közelebbről, az anyagot előzőleg 40 térfogat%-os vizes acetonitriloldattal ekvilibrált fordított fázisú oszlopba [(YMC; S-343 Cl—15 ODS) Yamamura Chemical Industries Co., Ltd.] injektáljuk. Az ultraibolyaabszorpciót 240 nm-en folyamatosan mérve a mintát kifejlesztjük és a fenti oldószereleggyel, 5 ml/perc átfolyási sebességet alkalmazva eluáljuk. A 30. és 39. perc között eluálódott frak ciókat összegyűjtjük. A fenti eljárást háromszor megismételve 185 mg kornexisztint kapunk, amelynek tisztasága kb. 90%. 3. példa 80 ml 1. példában ismertetett összetételű tápközeget tartalmazó, bedugaszolt 500 ml-es lombikba 1 kacsnyi Paecilomyces variotii SANK 21086 tenyészetet oltunk, és a lombikot 26°C- on 144 órán keresztül 200 fordulat/perc mellett rotációs rázógépen rázatjuk. A kapott tenyészet 75 ml-ével beoltunk két 30 literes fermentort, amelyek 15—15 liter 1. példában ismertetett tápközeget tartalmaznak, és a mikroorganizmust 26°C-on 192 órán keresztül tenyésztjük, 15 liter/perc levegőztetést és 150 — 180 fordulat/perc keverést alkalmazva. Az így kapott összesen 25 liter tenyészetet kg CeliteR 545 -tel keverjük, és szűrjük. A kapott 19 liter szűrlet pH-ját 2,5-re állítjuk, és 19 liter etil—acetáttal, majd további 9,5 liter etil—acetáttal extraháljuk. Összesen 28 liter etil-acetátos extraktumot kapunk. Az extraktumot háromszor 5 liter 0,1 mól/l koncentrációjú vizes dinátrium-hidrogén-foszfát—oldattal, majd ismét kétszer 5 liter telített, vizes nátirum-klorid-oldattal mossuk. A mosott extraktumot vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepárolva koncentráljuk. 2,02 g olajos anyagot kapunk. Az olajos anyag teljes mennyiségét feloldjuk etil-acetát és kloroform 1:1 térfogatarányú elegyében, és 500 ml Sephadex LH-20-szal töltött oszlopon — amelyet előzőleg ugyanezzel az oldószereleggyel ekvilibráltunk — kromatografáljuk. Az eluálást ugyanezen oldószereleggyel végezzük. Az eluátumot 20 ml-es frakciókban szedjük, a kornexisztint tartalmazó frakciókat (35 — 52. frakció) összegyűjtjük, és csökkentett nyomáson bepárolva koncentráljuk. 7,56 g olajos anyagot kapunk. A kapott olajos anyag teljes mennyiségét 10 ml metllén-kloridban oldjuk, és szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 3,7 g kornexisztint kapunk, színtelen, tűs kristályok formájában. 4. példa A kornexisztint 10 térfogat%-os vizes etanololdatban oldjuk, és 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldattal titráljuk. Az anyag két pKa értéket mutat (4,1 és 5,95), ami azt bizonyítja, hogy az (I) kópletű kornexisztin (II) képletű, felnyílt gyűrűs szabad savvá alakult. 5. példa Kornexisztin mono- és dinátriumsófának előállítása Az 1 —3. példa bármelyikével előállított kornexisztint vízben szuszpendáljuk, és a pH-t a mononátriumsó előállítására 6*1-re, a dinátriumsó előállítására 7,95-re állítjuk, 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldattal. A kornexisztin oldódik, a kapott oldatot részlegesen bepárolva a víz fő tömegét eltávolítjuk. A maradók vizet ezután liofilizálással távolítjuk el. Kornexisztin-mononátriumsó fizikai állandói: [ot]S>3 +63,13° (c-1.15, vízben) FAB tömegspektrum: 349 (M+H)+ (FAB: gyors atomokkal való bombázás) Ultraibolya abszorpciós spektrum (H2O) Lmax nm: 235 (váll) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) vmax cm : 3400, 2960, 1705, 1564, 1450, 1440, 1050, 1010 1H-Magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, D2O) 5 ppm: 0,68 (3H, triple«), 1.05 — 1,21 (3H, muitiplett), 1.49 (3H, dublett), 1,59 (1H, muitiplett), 2,62 (1H, kettős dublett), 2,75 (1H, dublett triplettje) 2,85 (2H, kettős dublett), 3,22 (1H, kettős dublett), 4,00 (1H, dublett), 4,90 (1H, kettős dublett), 5,46 (1H, kettős dublett). Kornexisztín-dinátriumsó fizikai állandói: [a]S3 = 61,15 (c=1,22, vízben) FAB-tömegspektrum: 371 (M+H)+ Ultraibolya abszorpciós spektrum (H2O) Xmax nm: 235 (váll) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) vmax cm 1: 3400, 2960, 1705, 1562, 1450, 1400, 1050, 1010 1 H-Magmágneses rezonancia spektrum (270 MHz, D2O) 5 ppm: 0,68 (3H, triplett), 1.05 — 1,22 (3H, muitiplett), 1.49 (3H, dublett), 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
