200796. lajstromszámú szabadalom • Eljárás E. coli kromoszómába történő nukleotid szekvencia beépítést biztosító expresszios vektorok előállítására

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

9

HU 200796 A

10

1. Eljárás E. coli kromoszómába történő nukleotid szekvencia beépítését, illetve az átalakított E. coli kromoszómát tartalmazó kiónok egyszerű elkülönítését biztosító plazmidok konstruálására — a plazmidok kialakítása során a génsebészet önmagában ismert módszereit alkalmazva, azzal jellemezve, hogy valamely, idegen gén kifejezésére alkalmas transzkripciós szabályozó szekvenciákat, továbbá ezen szabályzó szekvenciáktól függetlenül kifejeződő rezisztenciagént (továbbiakban R2) tartalmazó plazmidba az idegen gének kifejezésére alkalmas transzkripciós szabályzó szekvenciák közé az E. coli hordozó sejt egy kromoszómarészletének megfelelő kromoszómarószlet-kópiát, majd ettől downstream irányban egy R2—tői különböző, saját promoter nélküli rezisztencia gént (továbbiakban Rí) építünk be, végül beépített kromoszómarészlet-kóplába egy olyan szekvenciarészletet iktatunk be, amely minimálisan egy transzkripciós terminátort tartalmaz.

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal 5 jellemezve, hogy az E. coli hordozó sejt kromoszómarészlete a hordozó sejt szempontjából egy létfontosságú gén vagy annak egy részlete.

3. Eljárás tetszőleges nukleotid szekvenclá- 10 nak E. coli kromoszómába történő beépítésére,

illetve az átalakított E. coli kromoszómát tartalmazó kiónok egyszerű elkülönítésére, azzal jellemezve, hogy az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerint előállított plazmidvektort tar- 15 talmazó sejtekből indított kiónokat 10—20 órán keresztül az R2 génnek megfelelő antibiotikumot tartalmazó táptalajon növesztjük, a kinőtt egyedeket ezt követően az R1 génnek megfelelő antibiotikumot tartalmazó táptalajra 20 szólesztjük, végül az életben maradt kiónokat elválasztjuk és tovább tenyésztjük.

1 lap rajz, 4 ábra

6