200794. lajstromszámú szabadalom • Eljárás malária antigének kifejezésére
13 HU 200794 B 14 (befejező) szekvenciát lehet hozzátenni az átírás (transzkripció) megállítására. A kifejezendő beiktatott DNS lehet a P.195 teljes kódoló szekvenciája, vagy a teljes szekvencia, amelyről az amino-terminális jel szekvencia el van távolitva, vagy előnyösen lehet a fehérje egy immunogén fragmensének megfelelő kódoló szekvenciának egy része. Megfelelő fragmenseket lehet előállítani egy megfelelő cDNS vagy genom DNS klón restrikciós enzimes emésztésével (a nukleotid-szekvencia vizsgálata után), és ha szükséges, további kezeléssel az egyik vagy mindkét végén Bal 31-gyel úgy, hogy leemésztjük a DNS szekvencia egyes részeit szabályozott módon. A szabályozott emésztés a megfelelő puffer, reakcióidő és enzim-mennyiség kiválasztásával érhető el, pl. ahogyan ez a 8. példában le van Írva. Ennél a stádiumnál egy megfelelő szintetikus linkért adhatunk hozzá a beiktatáshoz előnyösen tompa-vég ligálással, igy AUG stárt kodont szolgáltatva vagy megkönnyítve a ligálást a kifejeződő vektorhoz. A jelen találmány egy további szempontja szerint olyan módszert adunk, amely magában foglalja egy gazdaszervezet transzformálását a fentebb meghatározott klónozó vektorral és a gazdasejt tenyésztését, hogy az említett P.195 kifejeződését szolgáltassuk, vagy annak legalább egy epitopját tartalmazó peptidjéL Bármilyen klónozott fragmens szabályozott kifejeződése lehetséges a szekvencia alkalmazásával a szekvencia valamelyik végénél, vagy már ismert más szekvenciák alkalmazásával. Az ilyen szekvenciák lehetnek promotorok és fokozok. Az ilyen promotorokra példák lehetnek a lac, trp, bakteriofág pL és trp-lac hibrid (tac). A megfelelő fokozok lehetnek az SV40 fokozó és a szarvasmarha papillomavirus fokozó. A jelen találmány egy további szempontja szerint egy olyan vektort nyújtunk, amely a jelen találmány szerinti fentebb említett DNS szekvenciát tartalmazza. A fentebb idézett vektor lehet bármilyen alkalmas vektor, amely megfelelő DNS klónozásához és amelyet lehet alkalmazni egy gazdasejt transzformálásához és ezáltal kifejezni a szóban forgó fehérjét. Az ilyen vektorok lehetnek plazmidok, bakteriofágok és kozmidok. A vektorok, amelyeket lehet alkalmazni a cDNS klónozásához, lehetnek a pUC8, pUC9, pAT153 és pBR328 Escherichia coli-ban való alkalmazáshoz, pBD9 és pKT438 a Bacillus subtilis-ben való alkalmazáshoz, pMA56 az élesztőben való alkalmazáshoz, és pAdD265V(A)-3, pSV2-dhfr, SVEHA3 és SVHLHA8 az emlős sejtekben való alkalmazáshoz. A szóban forgó fehérje kifejezésében való alkalmazásnál a vektorok magukban foglalhatnak szabályozó szekvenciákat is, amint ezt fentebb említettük. Ilyen vektorok lehetnek a pXY 460 és pWRL 507 az E. coli-ban való felhasználáshoz, vagy a pSV2-dhfr az emlős sejtekben való felhasználáshoz. A találmány egy további szempontja szerint egy olyan vektort szolgáltatunk, amely tartalmazza a találmány szerinti DNS szekvenciát, ezen kívül tartalmaz egy vagy több kontrollszekvenciát, hogy szabályozza az említett DNS szekvencia kifejeződését. A megfelelő gazdasejtekre a fentebb leirt módszerben való alkalmazásra példák lehetnek prokarióták, mint pl. baktériumok (pl. E. coli HB101 és DH1, B. subtilis BD170 és IH6140), vagy eukarióták, mint pl. élesztők (pl. XV610-8C élesztősejtek) vagy emlős sejtek (pl. majom CV-1 sejtek). A találmány egy másik megtestesülésében módszert nyújtunk a P.195 legalább egy részletének, vagy a P.195 legalább egy epitopját tartalmazó peptidnek szintézisére, ahol az emlitett P.195 vagy peptid kívánt esetben kovalensen kötve van további peptid szekvenciákhoz. A módszer a következő lépéseket tartalmazza: a. ) egy cDNS vagy genom DNS könyvtár létrehozása Plasmodium falciparumból; b. ) vizsgáló minta kiválasztása P. 195-höz és az emlitett vizsgáló minta radioaktívvá tétele; c. ) az emlitett könyvtár tagjának vagy tagjainak kiválasztása az emlitett vizsgáló minta alkalmazásával; és d. ) az ilyen módon az emlitett könyvtárból kiválasztott DNS alkalmazása egy megfelelő gazdaszervezet transzformálásához, amelyet használni lehet az emlitett P.195 vagy annak legalább egy epitopját tartalmazó peptid kifejezésére. A jelen találmány továbbá magában foglalja az emlitett P.195 fehérjét vagy annak legalább egy epitopját tartalmazó peptidet, amelyet a találmány szerinti fenti módszerek bármelyikével nyerjük. Ezeket az anyagokat be lehet építeni egy vakcinába, hogy immunitást vigyünk át malária ellen. Erre a célra az antigén fehérjét vagy annak legalább egy epitopját tartalmazó peptidet gyógyászatiig elfogadható hordozóval összekapcsolva szolgáltatjuk. Az antigén fehérjéket vagy peptideket egyedül vagy más, P.195 epitopot tartalmazó peptidekkel együtt, vagy egyéb olyan peptidekkel együtt, amelyek malária-ellenes immunitást nyújtanak, használhatjuk. Egy további szempont szerint egy vakcinát szolgáltatunk malária elleni immunitás előidézésére, amely P.l95~öt tartalmaz vagy egy olyan peptidet, amely a P.195-nek legalább egy epitopját tartalmazza, egy gyógyászatiig elfogadható hordozóval együtt. Gyógyszerészetiig elfogadható hordozók ebben az esetben folyékony közegek, amelyek alkalmasak vivőanyagként való alkalmazásra, hogy antigént vezethessünk be a paciensbe. Ilyen hordozóra példa a fiziológiás sóoldat. A P.195 vagy a peptid lehet oldatban, vagy szilárd anyagként hordozóban szuszpendálva, vagy lehet szolubilizált élla-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
