200785. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonadotropin releasing hormon antagonistái előállítására
7 HU 200785 B 8 Az (AC-/3-D-2NAL1, C°:Me4Cl-D-Phe2, D-Trp3, Arg5, D-Arg6, D-Ala10)-GnRH képlettel jellemezhető, fenti 1. számú peptid szilárd fázisú szintézisét az alábbiakban példaképpen ismertetjük. E peptid teljes képlete a következő: Ac-/3-D-2NAL-CcíMe-4Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Arg-D-Arg-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2. A szintézist egy benzhidril-amin típusú gyantán végezzük, amelyhez először a tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett D-alanint kapcsoljuk kétórás reakcióidővel, diklór-metános közegben, a védett D-alanin háromszoros fölöslegét használva, és aktiválószerként diciklohexil-karbodiimidet alkalmazva. Ennek a kapcsolásnak az eredménye- 5 képpen az alanin egy amidkőtéssel kapcsolódik a benzhidril-amin típusú gyantához. Az egyes aminosavak kapcsolása utón a gyanta kimosását, a védőcsoport lehasítását és a következő aminosavval való kapcsolást 10 körülbelül 5 g gyanta felhasználásával, egy automatizált készülékben, az alábbi műveleti rend szerint végezzük: Lépés Reagens és az elvégzendő művelet Keverési idő, perc 1. A gyantát kétszer 80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 2. A gyantát kétszer 30 ml metanollal mossuk. 3 3. A gyantát háromszor 80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 4. A gyantát kétszer 70 ml 50%-os diklór-metános trifluor-ecetsav-oldattal, amely 5% 1,2-dimerkapto-etánt is tartalmaz, kezeljük. 10 5. A gyantát kétszer 80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 6. A gyantát kétszer 70 ml 12,5%-os diklór-metános trietil-amin-oldattal kezeljük. 5 7. A gyantát kétszer 40 ml metanollal mossuk. 2 8. A gyantát háromszor 80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 9. A gyantát egyszer 10 mmol, az aminocsoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett aminosav 30 ml dimetil-formamiddal vagy diklór-metánnal készült oldatával (az oldószer megválasztása az adott, védett aminosav oldhatóságától függ), plusz 10 mmol diciklohexil-karbodiimid diklór-metánnal készült oldatával kezeljük. 30-300 10. A gyantát kétszer 40 ml metanollal mossuk. 3 11. A gyantát egyszer 70 ml 12,5%-os diklór-metános trietil-amin-oldattal kezeljük. 3 12. A gyantát kétszer 30 ml metanollal mossuk. 3 13. A gyantát kétszer 80 ml diklór-metánnal mossuk. 3 Ha a szintézist nem automatizált készülékben végezzük, akkor a 13. lépés után a gyanta egy kis részletét kivesszük, és ninhidrin-próbát végzünk. Ha a próba negatív, akkor visszamegyünk a műveleti rend első lépéséhez és kapcsoljuk a következő aminosavat; ha a próba pozitív vagy kismértékben pozitív, akkor visszamegyünk a műveleti rend kilencedik lépéséhez, és megismételjük a 9-13. lépést. Miután az első aminosavat a gyantához kötöttük, a jelen találmány szerinti peptid valamennyi aminosav-egységét a fenti műveleti rend szerint kapcsoljuk a már meglevő részlethez. A szintézis során valamennyi aminosav aC-amino-csoportját tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védjük. Az oC-amino-csoportján tercier-butoxi-karbonil-csoporttal védett ß-(2-naftil)-D-alanint önmagában ismert módszerrel, például a 4 234 571 számú, 1980. november 18-án közzétett amerikai szabadalmi leírásban részletesen ismertetett módon állítjuk elő. Az arginin oldalláncút tozilcsoporttal védjük. A szerin hidroxilcsoportjának védé- 50 sere benzilcsoportot használunk, és a 2. számú peptid előállítása során a D-tirozin oldalláncúban szereplő hidroxilcsoportot 2,6— di— klór-benzil-csoporttal védjük. A triptofánt nem védett formájában alkalmazzuk. Utolsó 55 aminosavként az oC-amino-csoportján tercier-butoxi-kar bonil-csoporttal védett ß-(2-naftil)-D-alanint kapcsoljuk. A diklór-metánban kevéssé oldódó Boc-Arg (Tos)-t és a Boc-D-Trp-t dimetil-formamid és diklór-raetán ele- 60 gyeiben kapcsoljuk. Miután az N-terminólisról lehasitjuk az cí-amino-csoport védöcsoportjót, ezen aminocsoportot úgy acetilezzük, hogy a szabad amino-vegyületet ecetsav-anhidrid nagy fe- 65 leslegével kezeljük diklór-metánban. A pep-6
