200763. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, helyetesített benzinidazolszármazékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200763 B 25 26G példa 2-(4-Pirrolidino-5-bróm-2-piridil-metil-tio)-5- metoxi-(lH)-benzimidazol előállítása 4-Morfolino-3-klór-2-klór-metil-piridin-hidrok lorídot 4-pirrolidino-5-bróffl-2-klór-metil-piridinhidrokloriddal (2,48 g) helyettesítve, és a 3F. példa eljárásában a többi reagenst megfelelő mólarányban használva 2-(4-pirrolidino-5-bróm-2-piridilmetil-tio)-5-metoxi-(lH)-benzimidazolt kapunk; 3,37 g, olaj. 26D. példa 2-(4-Pirrolidino-5-bróm-2-piridil-metil-szulfmil) -5-metori-(lH)-benzimidazol előállítása 2-(4-Morfolino-3-klór-2-piridil-metil-tio)-5-me to»-(lH)-benamidazolt 2-(4-pirrolidino-5-bróm- 2-piridil-metil-tio)-5-metoxi-(lH)-benzimidazollal (3,23 g) helyettesítve, és a 4. példa eljárásában a többi reagenst megfelelő mólarányban használva 2- (4-pirrolidino-5-bróm-2-piridil-mtil-szulfínil)-5-me toxi-(lH)-benzimidazolt kapunk, 2,6 g, olvadáspont 144 °C (bomlás). A. példa Orális alkalmazáshoz 9 mm-es tablettákat készítünk, melyeknek összetétele: mg/tabletta (I) általános képletű vegyület 100 Mannit 153 Keményítő 33 Crospovidone 12 Mikrokristályos cellulóz 30 Magnézium-sztearát 2 330 mg Ha hatóanyagként olyan (I) általános képletű vegyületet használunk, amelyben n = 1, a tablettát enterális bevonattal látjuk el. B.példa Orális alkalmazáshoz pellet-készítményt állítunk elő szokásos pelletező eljárások segítségével: t% (I) általános képletű vegyület 80 Mikrokristályos cellulóz 10 Nátrium-karboxi-metilcellulóz 2 Laktóz 8 Ha hatóanyagként olyan (I) általános képletű vegyületet használunk, amelyben n = 1, a perieteket a kemény zselatinkapszulákba való betöltés előtt enterális bevonattal látjuk el. C. példa Parenterális alkalmazáshoz injekció-készítményt állítunk elő: t% 1. példa vegyülete 1-5 Polipropilénglikol 40 Etanol 10 Víz (injekciókészítésre alkalmas) 100-ig Az oldatot sterilezzük, majd 2 és 5 ml-es ampullákba és fiolákba töltjük és légmentesen lezárjuk. Dl példa Parenterális alkalmazáshoz újraoldható liofilizátumot készítünk: t% (I) általános képletű vegyület 1-5 Mannit 15 NaCl a rekonstrituált oldat izotóniássá tételéhez szükséges mennyiségben Víz 100-ig Az oldatot aszeptikus szűréssel sterilezzük, 5 mles adagjait 15 ml-es fiolákba töltjük és az oldatot liofilizáljuk. A liofilizátumot 10 ml vízzel rekonstituáljuk. Biológiai adatok A. a -stimulált ATPáz aktivitás Az (I) általános képletű vegyület egyetlen magas dózisának (1 mM) a H+-ív ATPázra gyakorolt hatását pH 6,1-nél és pH 7,4-nél határozzuk meg. Az előnyös (I) álalános képletű vegyületeket széles koncentrációtartományba is vizsgáljuk az IC50 értékek megállapítása céljából (pH 6,1-nél és 7,4- nél). (i) //+-K+ATPáz: liofilizált gyomorvezikulumok előállítása H+-K+ATPázt liofilizált sertésgyomorfenéknyálkahártyavezikulumokból állítunk elő Saccomani és munkatársai szerint (Biochim. Biophys. Acta 405,311/1977/). (ii) K+-stimulált ATPáz aktivitás Az (I) általános képletű vegyületeket a fenti (i) pont szerint előállított H+-K+ATPáz preparátummal (30 p.g fehérje/ml) előinkubáljuk 10 mM PIPES-Trisz pufferben pH 6,1-nél és 7,4-nél. Az előinkubálást 37 *C-on 30 percig folytatjuk, majd a keveréket a fenti pufferrel 5x-ösére hígítjuk az ATPáz reakció megindítása céljából A reakcióközeg: 100 mM PIPES-Trisz, 2 mM MgCh, 10 mM KC1,5 pg/ml nigericin, 2 mM Na2ATP, pH 7,0.37 °C-on 15 percig inkubálunk, majd a felszabadult szervetlen foszfátot Yoda és Hokin szerint (Biochem. Biophys. Rés. Commun. 40,880/1970/) meghatározzuk. A nigericint metanolban oldottuk, amely a 0,5% végkoncentrációban nem befolyásolja az enzimaktivitást. A fenti koncentrációjú (I) általános képletű vegyület (előinkubálva pH 7,4-nél a H+-K+ATPáz preparátummal a fentiek szerint) hatását 100 nmól szervetlen foszfát visszanyerésére szintén meghatároztuk. Az (I) általános képletű vegyületeket dimetilszulfoxidban, polietilénglikolban (Type 400) vagy PIPES-Trisz pufferben oldjuk. Az oldószerek egyike sem befolyásolja a K+ATPáz aktivitást a használt koncentrációkban. Minden adat a vegyület előinkubálás alatti kezdeti koncentrációjára vonatkozik, azaz a próbapufferrel való felhígítás előtti koncentrációra. (iii) Eredmények A 2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,23,24,25. és 26. példák vegyületei valamennyien gátolták a K+-26 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
