200762. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új piridazin-amin-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200762 B til-4-(2-etoxi-2-oxo-etilidén)-3-metil-l-piperidinkarboxilátot kapunk. Fp.: 100 °C. f) 56,9 rész metil-4-(2-etoxi-2-oxo-etilidén)-3- metil-l-piperidin-karboxilát és 400 rész etanol keverékét normál nyomáson, szobahőmérsékleten 3 rész csontszénre felvitt palládium katalizátor alkalmazása mellett hidrogénezzük. A számított mennyiségű hidrogén felvétele után a katalizátort kiszűijük, majd a szűrletet bepároljuk. 57 rész (99%) etil-dsz-l-(metoxi-karboni)-3-metil-4-piperidin-acetátot kapunk. g) Keverés közben 20 perc alatt 26,1 rész káliumhidroxidnak 230 rész vízzel készült 15 °C-os oldatához 57 rész etil-cisz-l-(metoxi-karbonil)-3-metil-4- piperidin-acetátnak 91 rész etanollal készült oldatát csepegtetjük. A kapott oldatot egész éjjelen át szobahőmérsékleten keveijük, majd a reakcióelegyet 50 °C-t megközelítő hőmérsékleten bepároljuk. A maradékot darált jégre öntjük, hidrogén-kloriddal megsavanyítjuk, majd az így kapott terméket metil-benzollal extraháljuk (a vizes réteget félretesszük). Az extraktumot vízzel mossuk, szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. Az előzőekben félretett vizes részt Űdrogén-kloriddal savanyítjuk, majd az így kapott elegyet triklór-metánnal extraháljuk. Az extraktumot szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. A kapott anyagokat egyesítjük, így 54,2 rész (100%) cisz-l-(metoxi-karbonil)-3-metil-4-piperidin-ecet savat kapunk. h) Keverés közben 50 rész cisz- l-(metoxi-karbonil)-3-metil-4-piperidin-ecetsavnak 910 rész diklór-metánnal készült oldatához 55,8 rész tionil-kloridot csepegtetünk szobahőmérsékleten. A reakció lejátszódása után az elegyet egész éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően az elegyet bepároljuk. 48,8 rész (88,7%) metil-cisz-4-(2-klór-2-oxo-etil)-3-metil-l-piperidin-karboxilátot kapunk. i) Keverés közben 7,9 rész nátrium-tetrahidroborátnak 480 rész N,N-dimetil-formamiddal készült, jeges fürdővel 10 °C-ra lehűtött elegyéhez 48,8 rész metil-dsz-4-(2-klór-2-oxo-etil)-3-metil-lpiperidin-karboxilátot csepegtetünk (exoterm reakció). A reakció lejátszódását követően az elegyet egész éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet vízre öntjük, majd a terméket triklór-metánnal extraháljuk. Az extraktumot szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. 34 rész (80,4%) metü-cisz-4-(2-hidroxi-etil)-3-metil-l-piperidin-karboxilátot kapunk. j) 25 rész metil-cisz-4-(2-hidroxi-etil)-3-metil-lpiperidin-karboxilát és 350 rész 35%-os hidrogénklorid oldat elegyét keverés közben 1 órán át visszafolyatós hűtő alkalmazása mellett forraljuk. A kapott elegyet bepároljuk. 22 rész (100%) (cisz+transz)-3-metil-4-piperidin-etanol-hidrog én-kloridot kapunk. k) 20,7 rész 3,6-diklór-piridazin, 22,3 rész (cisz+transz)-3-metil-4-piperidin-etanol-hidrog én-klorid, 29,7 rész nátrium-karbonát és 188 rész N,N-dimetil-formamid keverékét 60 °C hőmérsékleten egész éjjelen át keverjük. Ezt követően az elegyet bepároljuk, a maradékot vízben felvesszük, majd a terméket diklór-metánnal extraháljuk. Az extraktumot szárítjuk, szűrjük, majd bepároljuk. A 49 máradékot oszlopkromatográfiás módszerrel tisztítjuk. Szffikagél töltet alkalmazása mellett először tnklór-raetán és metanol 96:4 arányú elegyével, majd ezt követően etil-acetát, ciklohexán és etanol 80:19:1 arányú elegyével, mint eluenssel végezzük a kromatografálást. A megfelelő frakciókról az eluenst elpárologtatjuk. 11,6 rész (36,6%) cisz-l-(6- kl6r-3-piridazinil)-3-metil-4-piperidin-etanolt kapunk. 1) Keverés közben 3,8 rész dsz-l-(6-klór-3-piridazinil)-3-metil-4-piperidin-etanol, 2£ rész etíl-4- hidroxi-benzoát, 3,9 rész trifenil-foszfin és 89 rész tetrahidrofurán 10 °C-os keverékéhez 2JS rész dietil-azo-dikarboxilátnak kevés tetrahidrofuránnal készült oldatát csepeghetjük. Egész éjjelen át tartó szobahőmérsékleten végzett keverés után a reakcióelegyet bepároljuk. A maradékot oszlopkromatográfiás módszerrel tisztítjuk (töltet: szilikagél; eluens: CHCI3/CH3OH = 99:1). A megfelelő frakciókról az eluenst lepároljuk, majd a maradékot 2- propanolból kristályosítjuk. A kapott terméket szüljük, 2-propanollal, majd 2,2’-oxi-biszpropánnal mossuk, majd 50 °C hőmérsékleten szárítjuk. 2,3 rész (38%) etü-cisz-4-[2-[l-(6-klór-3-piridazinil)-3-metil-4-piperidinil]-etoxi]-benzoátot kapunk. Op.: 110,7 °C. A fentiekhez hasonló módon állítjuk elő az etiltransz-4-[2-[l-(6-klóf-3-piridazinil)-3-metil-4-pip eridinil]-etoxi]-benzoátot. Op.: 112,1 °C. C. Biológiai példák Az (I) általános képletű vegyületek erős antivirális aktivitását a következő kísérletben bemutatott eredményekkel bizonyítjuk. Ezek az adatok csak példaszerűen mutatják az (I) általános képletű vegyületek hatásosságát, találmányunkat nem korlátozzuk az ott bemutatott vírusokra és (I) általános képletű vegyületekre. 47. példa Picornavirus minimális gátló koncentrációjának vizsgálata A találmány szerinti vegyületek minimális gátló koncentrációját a Human Rhinovirus törzs (HRV)-2, -9, -14, -15, -29, -39, -41, -42, -45, -51, -59, -63, -70, -72, -85, -86 és 89 törzseken a szokásos citopatikus hatást csökkentő vizsgálatban határozzuk meg. A 96 üreget tartalmazó mikrotitrátor szövettenyészet lemezének minden üregébe beviszünk 60 fii Ohk> Hela sejtfenntartó közeget (Eagle’s Basal közeg, amely 5% Foetal Calf Serum-ot (FCS) tartalmaz). Két üregbe beviszünk még 61 yl megfelelően hígított (I) általános képletű vegyületet és kétszeresre való hígítással további koncentrációit hozzuk létre az (1) általános képletű vegyületeknek. Ezután az üregekbe beviszünk 120 jd fertőzött vírus-oldatot Eagle’s Basal közegben, amely 2% Hepes puffert, 2% PCS-t és 30 mmól magnézium-kloridot tartalmaz, kivéve a sejtkontrollt és a vegyületkontrollt. A fertőzött vírus-oldat TCIDso-értéke (szövettenyészet fertőzési adag) mintegy 100. A TCIDso-érték a vírusnak az a mennyisége, amely a beoltott sejtben 50%-ban fejt ki citopatikus hatást. A kapott vírusvegyület-elegy 150 pj-ét ez-50 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 26
