200746. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, helyetesített karbamid-származékok és az ezeket tartalmazó, elsősorban antiateroszklerotikus hatású gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 200746 B T jellemezhetők. Általában szerves oldószerekben jól, vízben kevésbé oldhatók. Az (I) általános képletű vegyületek addíciós sókká alakíthatók szerves vagy ásványi anyagokkal. Mindkét típusú só megnövekedett vízoldékonyságú. Az (I) általános képletű vegyületek tulajdonságait és hasznosságát a következőkben táblázatokban fogjuk bemutatni. Az (I) általános képletű vegyületeket antiateroszklerotikus ágensként való potenciális alkalmazhatóságukra tekintettel kétféle biológiai hatásra vizsgáltuk. Egyrészt in vitro vizsgálatnak vetettük alá őket az ACÄT enzimmel szembeni gátlási képességük megállapítására, másrészt ugyancsak in vitro vizsgálatban a vérszérumban kifejtett hipolipidémiás aktivitásukat mértük, mint patkányoknál a lipid-abszorpció gátlásában kifejtett képességet. Az ACAT enzim gátlásában kifejtett hatást a következőképpen vizsgáljuk: Patkány-mellékveséket 0,2 mólos monobázikus kálium-foszfát-pufferben (pH-ja 7,4) homogenizálunk, majd a homogenizátumot 1000-szeres gravitációval 15 percen át 5 °C-on centrifugáljuk. A mikroszomális frakciót tartalmazó felülúszó szolgál a koleszterint észteresítő enzim, azaz az ACAT forrásaként. Ebből a felülúszóból 50 rész. albumin (BSA) 50 mg/ml koncentrációjú oldatából 10 rész. 3 rész kísérleti vegyület (végső koncentrációja: 5.2 g/ml) és 500 rész említett puffer elegyét 37 °C-on 10 perces előinkubálásnak vetjük alá, majd 20 rész oleoil-CoA(l4C - 0,4 Ci) hozzáadását követően 37 °C-on további 10 perces inkubálást végzünk. A kísérleti vegyület elhagyásával kontrollelegyet is készítünk és ugyanilyen módon kezeljük. Az inkubálást követően a rendszerekből a lipideket egy szerves oldószerrel extraháljuk, majd vékonyréteg-kromatográfiásan elkülönítjük. A koleszterin-észter frakciót szcintillációs számlálóval észleljük. Ez a módszer a Hashimoto és munkatársai által a Life Science, 12, (Part II) 1-12 (1973) szakirodalmi helyen ismertetett módszer módosított változata. A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek közül néhány reprezentatív vegyülettel elvégzett vizsgálat eredményeit az I. táblázatban adjuk meg. I. táblázat Kísérleti vegyület Százalékos gátlás 3-(2,4-difluor-fenil)-l-[4-(2.2-dimetiI-propil)-benzil]-l-heptil-karbamid 95,0 3-(4-klór-2,6-dimetil-fenil)-1-[4-(2.2- -dimetil-propil)-benzil]-l-heptil-karbamid 95,0 3-(2,4.6-trifluor-fenil)-1 -[4-(2,2-dimetil-propil)-benzil]-l-heptiI-karbamid 95,0 A koleszterin-abszorpció gátlását úgy állapíthatjuk meg, hogy 150-170 g súlyú hím Sprague-Dawley patkányokat olyan táplálékkal etetünk 2 héten át. amely 1 t% koleszterint, 0,5 t% kolsavat és 0,1 t% mennyiségben a kísérleti vegyületet tartalmazza. Kontrollcsoportként kísérleti vegyületet nem tartalmazó táppal etetünk patkányokat. A kísérlet végén a patkányokat dekapitáljuk. a vérüket összegyűjtjük. 4 °C-on 10 percen át 1,5 kg nehézségi erővel centrifugáljuk, majd a vérszérum koleszterin- és triglicerid-szintjét enzimatikusan Trinder, P. által az Analyst. 77, 321 (1952) irodalmi helyen ismertetett módszerrel. Centrifichem 400 analizátort használva megállapítjuk. A májakat eltávolítjuk, a nagy lebeny közepéből 0,4 g tömegű mintát veszünk és ezt a mintát 25 %-os telített etanolos kálium-hidroxid-oldattal elszappanosítjuk. A képződött semleges szterineket petroléterrel extraháljuk, majd az extraktum koleszterin-tartalmát meghatározzuk. Egy kísérleti vegyületnek a koleszterin abszorpciójára kifejtett inhibitáló hatása azáltal jelentkezik, ha a kontrolihoz képest kisebb a vérszérumban vagy a májban a koleszterin. A koleszterin-abszorpció statisztikailag szignifikáns inhibitálást okozó vegyületeket tekintjük aktívnak. A máj-szterin (LS) és vérszérum-szterin (SS) értékeket a kontrollértékek százalékában adjuk meg. Néhány tipikus vegyülettel kapott értéket adunk meg a II. táblázatban. II. táblázat Kísérleti vegyület LS SS 3-(2,4-difluor-fenil)-1 -[4-(2.2-dimetil-propilj-benzil]-1 -heptil-karbamid 24 24 3-(4-klór-2,6-dimetil-fenil)-l-[4-(2.2- -dimetil-propilj-benzil]-1 -heptil-karbamid 17 31 3-(2,4,6-trifluor-fenil)-1 -hept il-1 - [4- -(2,2-dimetil-propil)-benziI]-karbamid 14 21 A találmány szerinti gyógyászati készítmények előállítása során egy vagy több, a gyógyszergyártásban szokásosan használt, azaz gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagot, így például oldószereket vagy hígítószereket használhatunk. Orálisan beadható készítmények, például tabletták, kapszulák, diszpergálható porok, szemcsés készítmények és szuszpenziók a hatóanyagon és hordozóanyagon kívül mintegy 0,5-5 % szuszpendálószert, a szirupok pedig mintegy 10-50 % cukrot és az elixírek mintegy 20-50 % etanolt tartalmazhatnak. A parenteriálisan, steril injektálható oldat vagy szuszpenzió formájában elkészített készítmények mintegy 0.5-5 % szuszpendálószert tartalmazhatnak valamilyen izotóniás közegben. Az említett gyógyászati készítmények mintegy 0,5-90 %, gyakrabban 5-60 % hatóanyagot tartalmazhatnak, a hordozó- és/vagy segédanyagokkal kombinációban. A gyógyászati kezelés során a hatóanyagnak antiateroszklerotikusan hatásos mennyisége sokféle tényezőtől. így például a konkrét esetben használt vegyület jellegétől, a beadás módjától és a kezelendő tünet súlyosságától függ. Általában azonban a találmány szerinti vegyületekkel kielégítő eredmények érhetők el, ha napi mintegy 2-500 mg/testsúly kg dózisban adagoljuk őket, előnyösen napi 2-4-szeri beadással vagy késleltetett hatóanyagleadású formában. A legtöbb nagyobb méretű emlős esetén a napi összdózis mintegy 100-5000 mg, előnyösen 100-2000 mg. Az internális felhasználásra alkalmas dózisegységek a hatóanyagból mintegy 25-500 mg-ot tartalmaznak. szokásos szilárd vagy folyékony gyógyszer« 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
