200609. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag aktív foszfino-szénhidrogén csoport (VIII) csoporthoz tartozó fémekkel képezett komplexei és a vegyületeket tartalmazó tumorellenes készítmények előállítására
1 HU 200609 B 2 Megfigyeltük továbbá, hogy bizonyos kombinációk nem fordulnak elő a koordinációs kémiában jártas szakember számára nyilvánvaló okoknál fogva, például hogyha a fém palládium(II) és az anion Cl-, akkor 4-koordináció keletkezik és Xi és X2 nem fordul elő. Ha az anion Br, akkor IX és 1Y (5-ös koordináció), és ha az anion jód(I-), akkor 2X fordul elő és Y nem (6-os koordináció), ha az anion CIO4-, akkor X nem fordul elő és 2 Y van (4-es koordináció). A szakember számára ezek a lehetőségek azonban világosak. A találmány különösen olyan (I) általános képletül vegvületek előállítására vonatkozik, ahol Di =02 = foszfor vagy Di = foszfor és D2 = arzén; A = (CH2)2 vagy cisz-CH=CH-; Xi = X2 (ha mindkettő jelen van) halogénatomot vagy az egyik hidrogénatomot vagy nitrátcsoportot jelent; Y (ha jelen van), akkor halogenid, nitrát, perklorát, triflát lehet; n = 0, 1 vagy 2 M = Co(II), Rh(I), Rh(III) vagy Pd(II), feltéve, hogy M jelentése Co(II), Di = D2 = foszfor vagy Di = foszfor és D2 = arzén, A = -(CH2)2- vagy cisz-CH=CH-, Xi = halogénatom vagy nitrátcsoport, n = 1 és Y = halogenid, nitrát, perklorát vagy triflát vagy n = 2 és Y = perklorát vagy triflát; továbbá feltéve, hogy M = Rh(I), Di = D2 = foszfor, A =- (CH2)2- vagy cisz-CH=CH-, n = 1 és Y = klorid, nitrát, perklorát vagy triflát, vagy Xi = bróm vagy jód és n = 0; továbbá feltéve, hogyha M = Rh(III), Di = D2 = foszfor vagy Di = foszfor és D2 = arzén, A = -(CH2)2- vagy cisz-CH=CH-, Xi = X2 = halogén, n = 1 és Y = halogenid, nitrát, perklorát vagy triflát; és feltéve továbbá, hogyha M = Pd(II), Di = D2 = foszfor vagy Di = foszfor és D2 = arzén, A = -(CH2)2- vagy cisz-CH=CH-, Xi = X2 = jód és n = 0, vagy Xi bróm, n = 1 és Y = bromid, nitrát vagy triflát vagy n = 2 és Y = klorid, nitrát, perklorát vagy triflát és azzal a megkötéssel, hogyha M = Rh(III) akkor Di = D2 * foszfor és Y® * halogénatom és A * -(CH2)2-. A fenti hatóanyagok ismert módon könnyen előállíthatok. A szükséges kiindulási anyagok kereskedelmi forrásokból hozzáférhetők. Az 1,2-bisz-(difenil-foszfino)-etánt a következőkben difosznak nevezzük, az 1- -difenil-foszfmo-2-difenil-arzéno-etánt arfosznak és a cisz-l,2-bisz(difenil-foszfino)-etánt pedig dppen-nek. A kobalt(II) komplexek előállításához 2 mólekvivalens megfelelő ligandumot 1 mólekvivalens kobaltul) sóval reagáltatunk, amelyet ügy választunk meg, hogy a kívánt kovalens kötésű szervetlen X csoportot és az Y anionokat kapjuk; a reakciókat etanolban hajtjuk végre, reflux hőmérsékleten, (X=Y=halogenid) vagy acetonban végezzük szobahőmérsékleten (például X=Y=nitrát és Y 2 perklorát). A ródium(I) komplexek előállítására a szakember számára számos módszer ismert. így például először a kiindulási anyagot, azaz a (cisz,cisz-1.5-ciklooktadién) ródium(I)acetil-acetonátot állítjuk elő (cisz.cisz-l,5-ciklooktadién)-klór-ródium(I)dimérből, - acetil-acetonból és kálium-hidroxidból dietil-éterben -70 °C-tól szobahőmérsékletig terjedő hőmérsékleten, és ebből a termékből 1 mólekvivalenst reagáltathatunk 1 mól ekvivalens perklórsavval és 2 mólekvivalens megfelelő difosz vagy dppen ligandummal tetrahidrofuránban forráspont hőmérsékleten, és így Y = perklorát komplexeket kapunk. Az Y = triflát-tal képezett ródium(I) komplexeket előállíthatjuk 1 mólekvivalens (cisz,cisz-l,5-ciklooktadién)-klór-ródium(I) dimér és 2 mólekvivalens ezüst-triflát reagáltatásával acetonban, majd a keletkező ezüst-triflát reagáltatásával acetonban, majd a keletkező ezüst-klorid eltávolítása után 2 mólekvivalens megfelelő ligandummal reagáltatjuk (difosszal vagy dppen-nel). A ródium(III) komplexek előállításához 1 mólekvivalens ródium(III) halogenidet 2 mólekvivalens megfelelő ligandummal reagáltatunk etanolban reflux hőmérsékleten; és ebből a reakcióból Xi=X2=Y=halogenid vegyületeket kapunk, amelyeket átalakíthatunk Xt=X2=halogén és pl. Y=perklorát komplexekké például oly módon, hogy feloldjuk a vegyületeket metanol és víz elegyében, majd nátrium-perklorát feleslegével kezeljük. Az Y=2 kloriddal képezett palládium(II) komplexet úgy állíthatjuk elő, hogy a bisz(acetonitril)-diklór-palládium(II) vegyületet 1 mólekvivalens megfelelő ligandummal reagáltatunk visszafolyatási hőmérsékleten benzolban, majd még egy mól ekvivalens ligandummal reagáltatjuk dimetil-formamidban 80 ”C-on. Ezt a vegyületet átalakíthatjuk például Y=perklorátot tartalmazó analóg vegyületté, mégpedig úgy, hogy feloldjuk etanol és víz elegyében, majd híg perklórsav feleslegével kicsapjuk vagy az X1+X2 jodid vegyületté alakítást úgy végezzük, hogy a vegyületet feloldjuk etanol és víz elegyében, majd ezt az oldatot nátriumjodid feleslegének vízzel képezett oldatához adagoljuk szobahőmérsékleten. A találmány szerint gyógyászati készítményeket is állítunk elő, amelyek hatásos mennyiségű (I) általános képletű tumorsejt-növekedésgátló hatóanyagot és inert gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy hígítót tartalmaznak, és ahol a készítmények hatásosan meggátolják a hatóanyagra érzékeny állati tumorsejtek növekedését, és hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet alkalmazunk. In vitro citotoxicitás A fémkomplexek citotoxikus hatását in vitro éltékeltük ki B16-F10 patkány melanoma sejteken és HCT116 emberi vastagbél karcinoma sejteken. A B16- -F10 sejtvonalat Eagle’s Minimum Essential Medium (MEM) tenyészetben tartjuk, amely Earle féle sókat (Gibco) tartalmaz 2 mmól L-glutaminnal, 2,06 mmól piroszőlősav-nátriumsóval, 0,26 egység/ml penicillinnel, 100 egység/ml, ill. 100 fig/ml penicillin/sztreptomicinnel és MÉM nem esszenciális aminosavakkal (0,6 % Gibco) és 10 % magzati marhaszérummal (Hyclone) dúsítva. A HCT-116 sejteket McCoy féle 5A táptalajon tenyésztjük (módosított Gibco), melyhez még hozzáadunk 2 mmól L-glutamint, 0,12 mmól L-szerint és 0,17 mmól aszparagint, 1,5 mmól piroszölősav-nátriumsót, 0,6 % Gibco MÉM nem esszenciális aminosavakat. (0,67 % Gibco) nem esszenciális aminosavakat, és 0.6 % Gibco MÉM vitaminokat, és magzati borjúszérumot (10 % Hyclone), valamint 100 egység/ml és 100 ug/ml penicillin/sztreptomicint. Mindkét sejtvonalat 37 °C-on inkubáljuk 5 %-os széndioxidot tartalmazó levegőben nagy nedvességtartalmú inkubátorban. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
