200477. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-aldehidek előállítására
7 HU 200477 A 8 érték 8 alá esik, további trietilamint adagolunk. Ezt követően az clegyet 2 liter benzollal hígítjuk, a kivált sókat kiszűrjük és kétszer 500 ml benzollal mossuk. A bcnzolos-dimctilformamidosszürlethez 1,5 liter vizet adunk és a fázisokat elválasztjuk. A vizes-dimetilformamidos alsó fázist kétszer 500 ml benzollal kivonatoljuk. Az egyesített benzolos oldatokat kétszer 1 liter vízzel, egyszer 1 liter 0,1 n kénsavval, majd háromszor 1 liter vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson max. 40 'C-on 2 literre bepároljuk. 360 g Kieselgcl-G adszorbenst benzolban szuszpendálunk és szűrőágyat készítünk belőle, ahol az átmérőmagasság aránya 8 :1—4 : 1. A szűrőágyon a benzolos oldatot enyhe vákuummal átszivatjuk, majd ugyanilyen módon a szűrőágyat 4,8 liter benzollal átmossuk. Az egyesített benzolos oldatokat csökkentett nyomáson max. 40 'C-on kb. 600 ml térfogatra töményítjük, és erős keverés közben 3 liter diizopropil-étert adunk hozzá. A csapadékot kiszűrjük, kétszer 600 ml diizopropil-élcrrcl mossuk, és vákuum-exszikkátorban foszforpentoxid és paraffin-forgács mellett szárítjuk: 510 g (76%) cím szerinti terméket kapunk. Vckonyrélcgkromatográfiásan meghatározott össz-szennyezés 1-2%. Rf = 0,55-0,65 (etilacetát) (A D-L-D-laklám Rf értéke 0,45-0,50 etilacciátban) 20 [a]D = -55,8' (c = 1, tetrahidrofuránban) 2. lépés Bcnziloxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolil-hf'-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-aldchid 300 g (0,45 mól) védett tripcptid-laktámot (1. példa, 1. lépés) feloldunk 2,5 liter -5 'C-ra hűtött vízmentes tetrahidrofuránban. Az oldatot szárazjcges-acctonos fürdőben -20 és -25 “C közötti hőmérsékletre hűtjük és erős keverés mellett 20-25 perc alatt hozzáadagolunk 0,375 mól lítium-alumínium-hidridnek megfelelő kb. 0,7 mól/litcr töménységű tetrahidrofurános lítium-alumínium-hidrid-oldatot. A redukció előrehaladását vékonyrétcgkromatográfiával követjük etilacetát-piridinccetsav-víz (240 : 20 : 6 : 11) rendszerben. Szükség esetén további lítium-alumínium-hidrid-oldatot adagolunk, míg a laktám foltja 0,75-0,80 Rf értéknél el nem tűnik. A reakció befejeződése után a rcakcióclcgyet részletekben, keverés közben 3 liter 1 n 2-3 'C-os kénsavoldatba öntjük. A végső pH 2-3 értéket esetleges további kénsav hozzáadásával állítjuk be. Az oldathoz zavarosodásig vizet adunk, majd háromszor kirázzuk 0,9 liter n-hexánnal. Az egyes kirázások között az anyag olajosán elkülönül, ezért tctrahidrofuránnal homogenizáljuk, majd kevés vízzel opalizáljuk. A vizes fázist kétszer 2 liter diklór-metánnal kivonatoljuk. Az egyesített diklór-mctános oldatokat kétszer 0,5 liter 4-8 ‘C-os 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd kétszer 0,5 liter 4-8 *C-os desztillált vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és max. 40 'C-on csökkentett nyomáson bcpároljuk. (Körülbelül 300 g olajos terméket kapunk.) Az olajos maradékot diklór-metán-aceton 7:3 elegyben feloldjuk és 900 g Kiesclgel-60 adszorbcnsből diklór-metán-accton 7 : 3 eleggyel készített szűrőágyon (átmérő : magasság = 5:1) szívás nélkül átfolyatjuk, majd 6 liter ugyanilyen arányú eleggyel a szűrőágyat átmossuk. Az egyesített szürletekct csökkentett nyomáson max. 40 ‘C-on kb. 600 ml-rc töményítjük, 1 liter benzol hozzáadása után ismét 600 ml-re töményítjük, majd a terméket keverés közben 1,6 liter ciklohcxánnal kicsapjuk. A csapadékot kiszűrjük, kétszer 0,3 liter ciklohexánnal mossuk, és vákuum-exszikkátorban szobahőmérsékleten paraffin-forgács mellett szárítjuk. 240 g (79,7%) cím szerinti terméket kapunk. R( = 0,52-0,62 (etilacetát-piridin-ecetsav-víz = 240 : 20 : 6 : 11) Vékonyrétegkromatográfiásan mért szennyezés 0,5-2%. 20 [cOD = -40,8* (c = 1, tetrahidrofuránban) 2. példa D-Fenilalanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-szulfát előállítása 20,1 g (0,03 mól) bcnziloxi-karbonil-D-fcnilalanil-L-prolil-NG-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-a!dchidct feloldunk 214 ml tetrahidrofuránban és lehűtjük 0 ‘C-ra. 70 ml ionmentes vízben szuszpcndálunk 4,3 g csontszencs palládium katalizátort és 102 ml 1 n kénsavat (0,051 mól) adunk hozzá. A katalizátoros szuszpenziót 2-5 ‘C-ra hűtjük, a levegőt nitrogén gázzal kiűzzük, és keverés közben hozzáadjuk a fenti tetrahidrofurános oldatot, majd finom eloszlásban hidrogéngázt vezetünk a rendszerbe. A hőmérsékletet jeges hűtéssel 6-8 'C között tartjuk. A reakció előrehaladását vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük az 1. példában megadott oldószcrclcgyben. A reakció végén (kb. 3 óra) a kapott reakcióclegyct az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel. Hozam: 12,5 g (83,2%). Rf = 0,52-0,57 (etilacetát-piridin-ecetsav-víz = = 25:20:6:11) [oc]D = -117' (c = 1, vízben) Vckonyrétcgkromatográfiásan mért szennyezés 1,5%, HPLC-vel mért DLD-izomer tartalom 3,5%. 3. példa D-Fenilanil-L-prolil-L-arginin-aldefúd-szulfát előállítása Feloldunk 201 g (0,3 mól) benziloxi-karbonil-D-fenil-alanil-L-prolil-N^-bcnziloxi-karbonil-L-arginin-aldchidet szobahőmérsékleten 2 liter etanolban. 60 g 10% palládiumot tartalmazó báriumszulfátos kataliziátort 0,6 1 ionmentes vízben szuszpendálunk és hozzáadunk 600 ml 1 n kénsavat (0,3 mól). A szuszpenziót 2-5 *C-ra hűljük, s hozzáadjuk a védett tripeptid-aldehid etanolos oldatát, majd annyi ionmentes vizet, hogy az oldószer és vizes rész aránya 6:4 legyen. Az elegyen 6-8 'C-on keverés és hűtés közben hidrogéngázt buborékoltatunk át A hidrogénezés előrehaladását vékonyrétegkromatográfiával követjük az 1. példában megadott módon. A reakció végén (kb. 3-4 óra) a katalizátort kiszűrjük és ionmentes vízzel többször átmossuk. A szürletekct egyesítjük és forgó vákuumbcpárlóban 25-30 'C-on alkohol-mentesítjük. A vizes oldatot, melynek pH-ja kb. 3-4, közvetlenül liofilizáljuk. 133 g (85,5%) cím szerinti terméket kapunk monohidrát formájában, mely azonos minőségű az 1. példa termékével. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
