200461. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 9-(N-hidroxi-alkoxi)-purin-származékot és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 200461 B 2 (1H, d, J=5,0 Hz, D20-val cserélhető, OH); 6,62 (2H, széles s, D20-val cserélhető, NH2); 7,90 (1H, s, H-8), 10,64 (1H, széles s, Ü20-val cserélhető, NH); m/z 241 (M; 13 %). Elemzési eredmények a C8H11N5O4X4 H2O képlet alapján: számított: C=38,68 %, H=4,79 %, N=28,19 %, M=241,0811; talált: C=38,89 %, H=4,81 %, N=28,19 %, M=241,0820. 'H-NMR: delta H (CD3)2SO 3,40 (2H, m, CH2OH), 3,75 (1H, m, CHOH), 3,96 (3H, s, CH3), 4,13 (1H, q, J=7,7, 10 Hz, CH2ON), 4,36 (1H, q, J=3,3, 10,5 Hz, CH2ON), 4,71 (1H. t, J=5,8 Hz, 020-val cserélhető, OH), 5,18 (1H, d, J=5,2 Hz, D20-val cserélhető, OH), m/z 255 (M+, 31 %). Elemzési eredmények a C9H13N5O4X 0,5H2O képlet alapján: számított: C=40,91 %, H=5,34 %, N=26,51 %, M+=255,0967; talált: C=40,95 %, H=5,40 %, N=26,62 %, M+=255,0965. 27. példa (R)-9-(2,3-Dihidroxi-prop-l-oxi)-guanin Olvadáspont: 255 °C (bomlik). [a]D25= -14,90 ‘C c=0,l %, víz) UV: Xmax (H20) 252 (el2200)nm, IR: Vmax (film) 3340, 3190, 1690, 1640, 1600, 1540 cm' 1. 1 H-NMR: delta H [(CDsfeSO] 3,39 (2H, m, CH2OH), 3,73 (1H, m, CH), 4,10 (1H, q, J=7,7, 10,5 Hz, CH2ON), 4,32 (1H, q, J=3,3, 10,5 Hz, CH2ON), 4,70 (1H, t, J=5,6 Hz, Ö20-val cserélhető, OH), 5,15. (1H, d, J=5,0 Hz, D20-val cserélhető, OH), 6,62 (2H, széles s, 020-val cserélhető, NH2), 7.90 (1H, s, H-8), 10,55 (1H, széles s, DaO-val cserélhető, NH). m/z 241 (M+, 2 %). Elemzési eredmények a C8HnN5C>4x0,3 H2O képlet alapján: számított: C=38,39 %, H=4,82 %, N=28,00 %, M+=241,0807; talált: C=37,91 %, H=4,80 %, N=28,ll %, M+=241,0797. 28. példa 9-(3,4-Dihidroxi-but-1-oxi)-guanin Olvadáspont: 254—258 °C. UV: Xmax (H20) 252 (e 12900) nm. IR: Vmax (film) 3330, 3170, 1690, 1640, 1600, 1540, 1475 cm1. 1 H-NMR: delta H (CD3)2SO 1,64 (1H, m, CH2CH2ON), 1,88 (1H, m, CH2CH2ON), 3,31 (2H, m, CH2, OH), 3,61 (1H, m, CHOH), 4,34 (2H, m, CH2ON), 4,58 (1H, t, J=5,5 Hz, D20-val cserélhető, OH), 4,64 (1H, d, J=4,9 Hz, Ü20-val cserélhető, OH). 6,59 (2H, széles s, D20-val cserélhető, NH2), 7.91 (1H, s, H-8), 10,38 (1H, széles s, DaO-val cserélhető, NH). m/z 255 (M+, 10 %). Elemzési eredmények a C9H13N5O4 x 0,5 H2O képlet alapján: számított: C=40,91 %, H=5,34 %, N=26,51 %, M+=255,0967; talált; C=40,78 %, H=5,31 %, N=26,66 %, M+=255,0968. A 7., 9., 10., 16., 29. és 30. példák szerinti vegyületeket olyan 6-klór-vegyület redukálása útján állíthatjuk elő, amelynél a 2- aminocsoport, illetve Ri, R2 és/vagy R3 helyén a hidroxilcsoportok adott esetben védve vannak [lásd a (VI) általános képletű vegyületeket az 5., 10. és 13. referenciapéldákban]. Ezt követően szükséges esetben Ri, R2 és R3 helyettesítőkből és/vagy a 2-aminocsoportról a védőcsoportot eltávolítjuk. A 4., 20. és 26. példák szerinti vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy a megfelelő ORs-alkoholát ionnal reagáltatunk egy olyan megfelelő 6-klór-vegyületet, amelynek 2-aminocsoportja, illetve Rj, R2 és/vagy R3 helyetesítőkben a hidroxilcsoportok adott esetben védve vannak (lásd a 2. referenciapélda (c) és (d) lépését, illetve a 11. referenciapéldát). A következőkben az antivirális aktivitás meghatározását ismertetjük. 1. Plakk redukciós teszt 1. és 2. típusú herpesz simplex vírusokra 24 lyukú (lyukátmérő 1,5 cm) tenyésztőedényben sejteket (Verő vagy MRC-5) tenyésztünk összefolyásig. A sejtnedv eltávolítása után a sejt-egyrétegek mindegyikét 1. típusú herpesz simplex vírus (HSV-1; HFEM törzs) vagy 2. típusú herpesz simlex vírus (HSV-2; MS törzs) közel 50 fertőző részecskéjének 100 pl, foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldattal készült keverékével fertőzzük meg. A vírust szobahőmérsékleten 1 órán át adszorbeálódni hagyjuk. Az adszorpciót követően a visszamaradt oltóanyagot mindegyik lyukból eltávolítjuk és 0,5 ml úgynezvezett Eagle’s MEM-folyadékkal - 5 % újszülött borjú szérumot és 0,9 % agarózt tartalmaz (A37) - helyettesítjük. Miután az agaróz kiülepedett, a kísérleti vegyület Eagle’s MEM-folyadékkal (5 % újszülött borjú szérumot tartalmaz) készült hígításait adagoljuk, mindegyik lyukba 0,5 ml folyadékot rétegezve. A kísérleti vegyületet úgy hagítjuk, hogy a következő koncentrációsorozatot kapjuk: 200, 60, 20, 6...0.06 pg/ml; így tehát a vizsgált kísérleti tartományban a végső koncentráció 100 pg/ml és 0,03 pg/ml közötti. A fertőzött kultúrákat 37 *C-on 5 térfogat % széndioxidot tartalmazó, nedvesített atmoszférában inkubáljuk addig, míg a plakkok világosan láthatóvá válnak (a Vero-sejtek esetében 2 vagy 3 nap, az MRC-5 sejtek esetében rendszerint 1 nap). 2. Plakk redukciós teszt Varicella zoster vírusokra 24 lyukú (lyukátmérő 1,5 cm) tenyésztőedényben MRC-5 sejteket tenyésztünk összefolyásig. A sejtnedv eltávolítása a sejt-egyrétegek mindegyikét varicella zoster vírus (VZV; Ellen-törzs) közel 50 fertőző részecskéjének 100 pl, foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldattal készült keverékével fertőzzük meg. A vírust ezután szobahőmérsékleten 1 órán át adszorbeálódni hagyjuk. Az adszorpciót követően a visszamaradt oltóanyagot mindegyik lyukból eltávolítjuk és 0,5 ml, az előző tesztnél definiált összetételű Eagle’s MEM-folyadékkal helyettesítjük. Miután az agaróz kiülepedett, a kísérleti vegyület Eagle’s MEM-folya-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
