200313. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyulladásellenes hatású 2,4,5-triszubsztituált-fenol-származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 200313 B 31 TI. táhlázat folytassa Vegyűlet Példa száma Dózis* (%) FII duzzadás százalékos ikhibiáttsa 97 1 18 104 1 60 !06 1 58 110 0,05 40 0,01 44 117 0,05 0 118 1 10 119 1 58 * A vegyűlet százalékos koncentrációin az otapolos gélben IL-1 ellenes halás (Thvmocvta fktivitfol 3-4 hetes C3H/HeJ hím egetek csecsemőmirigyét kioperáltuk és 100 mesh szűrőn vittük át és Így egy egysejtes szuszpenziót hoztunk létre. A sejteket 2x10' 5 mól 2-merkapto-etanollal 3%-os borjú magzat szó- • rummal és 1% penicillin/sztrcptomiciaael kiegészített RPMI-1640-ben szuszpeadáltuk. Asejtszuszpenziót egy szövettenyésztő edénybe helyeztük és 1-2 óráig 37 'C-on 5% széndioxidban iakuháituk. A thymocytákat dekantáltuk és így ax adherált sejtek visszamaradtak. Ezután a folyadékot 1400 ford/perc sebességgel 10 percig centrifugáltak. A felászót dekantáltuk, majd a sejteket újra szuszpeadáltuk és hemocytométerrel számláltuk. A sűrűséget 2xl07 sejt/ml értékre állítottuk be. Egy 96-(lieget tartalmazó mikrotitráló lemez minden ütegébe 15 mikro 1 szuszpenziót helyeztünk majd 25 mürao 1 PHA-t és 25 mikro 1 IL-l-t (1:25 hígítása egy 10 tncg/ml tárult oldatnak) adtunk minden üregbe. Minden vizsgált vegyületct 30% DMSO/70% PBS elegyben oldottunk, és 1 mg/ral koncentrációjú tárok oldatot képeztünk belóle. 15 mikro 1 tárok vegyűlet oldatot adunk minden vegyűlet esetében egy hígító lemezen 300 mikro 1 közeghez. Ezután 25 mikro 1 vizsgálandó vegyűlet oldatot adtunk a tesztvizsgálati ■emezen négy-négy üregbe átlósai a lemezen. A leiezt 37 'C-on 5%-os széndioxid tartalmú levegő légyben 48 óráig inkubáltuk. Ezután az üregeket tóriummal jelölt timidinnel kezeltük (5 mikroCi/íireg) négy (kán át mielőtt a tenyésztett egy Skatron sejt tenyészet gyűjtőn összegyűjtöttük. A szádlemezeket mini-ampullákba helyeztük és szcintilláctós folyadékot (Tol-Pop) adtunk hozzá, majd az ampullákat számláltuk. Minden ampulla számlák értékét összehasonlítottuk a kontroll minták értékével, amelyekbe nem adtunk vizsgált vegyületet (csak hordozóanyagokat) és így százalékot adtunk meg minden vizsgált együletre, amelyet a III. táblázatban közlünk, mint ä T-sejt csökkentő hatás értéket ni. táblázat AzIL-l indukált T-sejt burjánzás csökkentő hatás • Vegyűlet T-sejt csökkentő hatás százalék Példa 32 10 mcgAnl 1 mcg/ml 15 91 33 20 99 39 30 91 32 36 75 15 38 28-8 68 99 13 76 79 39 80 88 21 81 43 29 87 39 9 88 47 3 90 38 5 95 85 14 103 26 47 105 56 7 111 96 29 118 87 37 119 90 36 121 85 30 125 99 41 127 59 15 Egér adottam sokk tesztvizsgálat 18-20 g-os C57BL/6 hím egereknek vizsgált vegyületeket adagoltunk és különböző életmódon tartottuk fleet az adagolás módjától függően. A kontroll állatok csak a megfelelő hordozóanyagokat kapták. Az egereket 0,2 ml kromatográfiásan tisztított 0111:B4 Exoli. LPS-sel és galaktózamin hidrokloriddal (GALN) kezeltük, amelyet azubkután (a nyak hátoldalára) alkalmaztunk. A GALN-t körülbelül 500 mg/kg dózisban adagoltuk míg a LPS dózis 03-1,2 mikro g/egér (15-60 mikro g/kg) volt A kontroll állatok általában sokk hatására a LPS/BALN beadagolás után 7-15 óra múlva elpusztulnak és kis számú állat (0-5%) élt az adagolás után 24-48 óra múlva. Az EDso számítását minden egyes vizsgált vegyűlet esetében Reed Muench módszerrel végeztük az adagolás utáni 48 (kával nyert eredményekre. Az eredményeket a IV. táblázatban mutatjuk be. IY. táblázat Egér endotoxin sokk kísérlet Vegyűlet Példa száma EDso (mg/k 47 25 48 18,6 49 50 50 9,5 51 27 54 21 55 3,1 68 50 80 50 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
